PCR室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)

文件編號(hào)：ABCD-3-PR-01~31

第A版

編制：

審核：

批準(zhǔn)：

生效日期：2006年8月8日

ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

編  制  說(shuō)  明

本分冊(cè)文件可以作為單獨(dú)申請(qǐng)衛(wèi)生部PCR實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的全套作業(yè)文件，因此作為ISO15189質(zhì)量管理體系的PCR室作業(yè)文件，要對(duì)其重復(fù)部分進(jìn)行刪減，各檢驗(yàn)科根據(jù)各自用途要求與特點(diǎn)進(jìn)行選用，特此說(shuō)明。

                                              2006年8月8日

目    錄

  修 訂 頁(yè)

PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及管理

1．目的：建立實(shí)驗(yàn)室的合理設(shè)置和科學(xué)管理，防止實(shí)驗(yàn)污染，保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

2．適用范圍：本程序適用于分子診斷室的設(shè)置、工作流程和日常管理等。

3．負(fù)責(zé)人：

4．細(xì)則：

4．1 分子診斷室為檢驗(yàn)科下設(shè)的專業(yè)實(shí)驗(yàn)室，從事臨床標(biāo)本的基因擴(kuò)增檢測(cè)及相關(guān)科研工作。

4．2 本實(shí)驗(yàn)室采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)作為臨床基因診斷的主要手段，實(shí)驗(yàn)室分為三個(gè)區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)（第一區(qū)）、標(biāo)本處理區(qū)（第二區(qū)）、擴(kuò)增分析區(qū)（第三區(qū)）。每一工作區(qū)配備專用的設(shè)備、儀器、輔助設(shè)施、耗材、清潔用品、辦公用品、專用工作服，并有明顯的區(qū)分標(biāo)識(shí)。各區(qū)標(biāo)簽顏色：紅色（第一區(qū)）、白色或綠色（第二區(qū)）、藍(lán)色（第三區(qū)）；專用工作服：粉紅色（第一區(qū)）、白色（第二區(qū)）、藍(lán)色（第三區(qū)）。標(biāo)本的接收則在檢驗(yàn)科標(biāo)本接收處進(jìn)行。

4．3 各工作區(qū)專用的儀器設(shè)備、辦公用品、工作服、實(shí)驗(yàn)耗材和清潔用具等，不可混用。

4．4 各工作區(qū)配置、功能和內(nèi)務(wù)管理見(jiàn)各相關(guān)SOP文件。

4．5 嚴(yán)格遵守從“試劑準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本處理區(qū)→擴(kuò)增分析區(qū)”的單一流向制度，不得逆向進(jìn)入前一工作區(qū)。

4．6 非本實(shí)驗(yàn)室工作人員，未經(jīng)許可不得入內(nèi)；進(jìn)修、實(shí)習(xí)或其他科室人員因科研活動(dòng)需要，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)區(qū)域（試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)）需首先熟悉本程序的各項(xiàng)規(guī)定并嚴(yán)格遵守執(zhí)行，在本實(shí)驗(yàn)室人員監(jiān)督指導(dǎo)下進(jìn)行。

4．7 實(shí)驗(yàn)完畢后做好清潔消毒工作。

5. 本文涉及以下圖表：

1.實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)平面圖

PCR實(shí)驗(yàn)室工作制度

1．目的 ：保持良好的工作環(huán)境，以確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性，防止交叉污染，防止差錯(cuò)、事故及糾紛的發(fā)生。

2．適用范圍：所有本實(shí)驗(yàn)室人員。

3．負(fù)責(zé)人：

4．細(xì)則：

4．1 本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行臨床基因擴(kuò)增檢測(cè)及相關(guān)實(shí)驗(yàn)工作，不得進(jìn)行其它實(shí)驗(yàn)操作。

4．2各區(qū)的用品不得混用。

4．3在各區(qū)的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，操作者必須戴手套和帽子，嚴(yán)格按照操作規(guī)程。

4．4試劑準(zhǔn)備區(qū)只能進(jìn)行試劑的貯存及配制等相關(guān)操作（見(jiàn)相關(guān)SOP文件）。

4．5標(biāo)本處理區(qū)只能進(jìn)行臨床標(biāo)本的保存，核酸提取、保存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成（見(jiàn)相關(guān)SOP文件）。

4．6擴(kuò)增分析區(qū)只能進(jìn)行DNA或cDNA的擴(kuò)增、實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的分析（見(jiàn)相關(guān)SOP文件）。

4．7進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行本實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)操作規(guī)程，及時(shí)做好各種操作記錄，力求準(zhǔn)確、可靠。實(shí)驗(yàn)完畢，做好清潔、整理及分析統(tǒng)計(jì)等工作。

4．8室內(nèi)儀器由專人負(fù)責(zé)，未經(jīng)許可，不得隨意使用或挪用；愛(ài)護(hù)使用儀器，定期進(jìn)行保養(yǎng)與維修。

4．9 愛(ài)護(hù)醫(yī)院財(cái)產(chǎn)，注意安全；離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)關(guān)好門窗，檢查水、電等。

PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度

1．目的：保證實(shí)驗(yàn)室日常內(nèi)務(wù)管理及清潔工作順利進(jìn)行。

2．適用范圍：實(shí)驗(yàn)室相關(guān)人員及醫(yī)院相關(guān)清潔工人。

3．負(fù)責(zé)人：

4．細(xì)則：

4．1非本室工作人員未經(jīng)允許不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。

4．2各區(qū)的用品不得混用。

4．3實(shí)驗(yàn)人員要有強(qiáng)烈的時(shí)間觀念，按時(shí)上下班，不遲到、早退。

4．4進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須遵守實(shí)驗(yàn)室的單一流向的規(guī)定，禁止逆向走動(dòng)。

4．5所有儀器（如PCR擴(kuò)增儀）須有專人負(fù)責(zé)，并有使用維護(hù)記錄；實(shí)驗(yàn)人員必須熟悉儀器性能后方允許操作，并嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。

4．6所有試劑進(jìn)購(gòu)、配制、質(zhì)檢、使用均要有記錄，未經(jīng)允許不得隨意帶出本實(shí)驗(yàn)室。

4．7每天了解儀器運(yùn)轉(zhuǎn)情況及試劑使用情況，確保儀器整潔安全，試劑合格使用。

4．8各區(qū)的各種清潔消毒均應(yīng)有記錄，工作衣消毒時(shí)注意各區(qū)應(yīng)分開(kāi)進(jìn)行處理。

4．9注意保持實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生整潔，嚴(yán)禁在室內(nèi)抽煙、吃零食，非實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)盡量少入。4. 10下班前檢查門、窗、水、電，節(jié)假日應(yīng)指定人員負(fù)責(zé)檢查實(shí)驗(yàn)室的儀器、設(shè)備。

PCR實(shí)驗(yàn)室人員的配置及管理

1．目的：保證實(shí)驗(yàn)室有足夠數(shù)量的合格的具備開(kāi)展該類實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Φ膶?shí)驗(yàn)人員。

2．適用范圍：適用于實(shí)驗(yàn)室人員配置、管理、培訓(xùn)及考核。

3．負(fù)責(zé)人：

4．細(xì)則：

4．1   人員要求

4．1．1   本實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)或相關(guān)專業(yè)畢業(yè)，具有中級(jí)以上技術(shù)職稱或?qū)？埔陨蠈W(xué)歷。

4．1．2    實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)參加衛(wèi)生部或省臨檢中心舉辦的PCR技術(shù)培訓(xùn)，并取得合格證。

4．1．3    對(duì)于新進(jìn)入本室的人員，如尚未取得PCR技術(shù)培訓(xùn)合格證，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室有培訓(xùn)合格證的上級(jí)技術(shù)人員的指導(dǎo)下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)工作，實(shí)驗(yàn)報(bào)告由有資格人員出具，并應(yīng)在最短的時(shí)間內(nèi)取得上崗培訓(xùn)合格證。

4．2   人員配置

4．2．1   實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)工作需要配備足夠的工作人員，目前實(shí)驗(yàn)室有主管技師2人、技師1人，3人都已獲得培訓(xùn)合格證，視工作量的增加和業(yè)務(wù)發(fā)展需要，會(huì)適當(dāng)增加工作人員。

4．2．2   各級(jí)技術(shù)人員履行相應(yīng)的工作職責(zé)。

4．3   人員培訓(xùn)及考核

4．3．1   實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或負(fù)責(zé)人指定人員參加每年衛(wèi)生部PCR室間質(zhì)評(píng)總結(jié)會(huì)。

4．3．2   實(shí)驗(yàn)室工作人員每1～2年至少參加1次PCR技術(shù)的省級(jí)或國(guó)家級(jí)繼續(xù)教育項(xiàng)目，參加相關(guān)學(xué)術(shù)交流會(huì)議。

4．3．3   安排未取得上崗培訓(xùn)合格證的工作人員在合適的時(shí)間內(nèi)參加技術(shù)培訓(xùn)。

4．3．4  科室不定期組織實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部實(shí)驗(yàn)人員學(xué)習(xí)、更新核酸擴(kuò)增方面的相關(guān)知識(shí)，提升自身的理論學(xué)習(xí)水平。特別是在標(biāo)本接收區(qū)采血、接收標(biāo)本的人員，需定期對(duì)其進(jìn)行有關(guān)核酸擴(kuò)增技術(shù)，標(biāo)本采集、保存、運(yùn)輸?shù)戎�識(shí)的培訓(xùn)。一些科室的送檢標(biāo)本由該科室的人員送到標(biāo)本接收區(qū)，對(duì)這些臨床醫(yī)護(hù)人員也要定期進(jìn)行有關(guān)核酸擴(kuò)增技術(shù)，標(biāo)本采集、保存、運(yùn)輸?shù)戎�識(shí)的培訓(xùn)。

4．3．5  本實(shí)驗(yàn)室工作人員每年進(jìn)行考核一次,考核內(nèi)容:

a)日常工作質(zhì)量

b)室內(nèi)質(zhì)控測(cè)評(píng)

c)室間質(zhì)控測(cè)評(píng)

d)在抱怨處理中的表現(xiàn)

 4．3．6  本實(shí)驗(yàn)室工作人員實(shí)行嚴(yán)格獎(jiǎng)懲制度,有下列表現(xiàn)者可受獎(jiǎng):

a)工作質(zhì)量高, 質(zhì)控測(cè)評(píng)成績(jī)優(yōu)秀者

b)有科研能力,并有一定數(shù)量和質(zhì)量的論文發(fā)表

c)有獨(dú)創(chuàng)性工作成果,經(jīng)鑒定認(rèn)可者

d)受到有關(guān)部門或群眾嘉獎(jiǎng)?wù)?/P>

有下列情況者將受到懲處:

a)工作質(zhì)量問(wèn)題較多，質(zhì)控測(cè)評(píng)成績(jī)不合格；

b)不遵守規(guī)章制度并造成一定影響；

c)不求上進(jìn)。

4．3．7  本實(shí)驗(yàn)室工作人員獎(jiǎng)懲方法分精神及物質(zhì)兩類,經(jīng)實(shí)驗(yàn)室上報(bào)醫(yī)院及有關(guān)部門批準(zhǔn)后執(zhí)行。

4．3．8 本實(shí)驗(yàn)室工作人員均建立業(yè)績(jī)檔案,實(shí)行能進(jìn)能出制度,不斷吸收高質(zhì)量人員,加強(qiáng)培訓(xùn)和提高,對(duì)于不適合本室工作的人員要及時(shí)調(diào)離。

4．4   人員管理

4．4．1 實(shí)驗(yàn)室建立所有工作人員的技術(shù)檔案，包括：學(xué)歷、任職資格、發(fā)表論文、研究成果、培訓(xùn)等相關(guān)材料復(fù)印件。

4．4．2  技術(shù)檔案分文本檔案和電子檔案，文本檔案每年更新1次，電子檔案隨時(shí)更新。

5. 本文涉及以下表格

實(shí)驗(yàn)室主要負(fù)責(zé)人簡(jiǎn)歷表        

PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表        

培訓(xùn)申請(qǐng)表                      

  年度培訓(xùn)計(jì)劃表                   

培訓(xùn)記錄表                      

員工培訓(xùn)履歷表                   

人員檔案卡                       

PCR實(shí)驗(yàn)室清潔程序

1．目的：保證實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的整潔，防止污染。

2．適用范圍：適于實(shí)驗(yàn)室工作環(huán)境、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、工作服、移液器等的清潔消毒工作。

3．負(fù)責(zé)人：        操作人：

4．細(xì)則：

4．1 實(shí)驗(yàn)室地面必須平整、干凈，通道要利于通行，沒(méi)有無(wú)用的物品阻礙。

4．2 合理規(guī)劃實(shí)驗(yàn)室內(nèi)物品，做到擺放整齊、有序，無(wú)用的或使用效率低的物品放置到儲(chǔ)存處，常用的物品要容易尋找到。

4．3抽屜、柜子、文件類物品要作好標(biāo)記，以方便識(shí)別。

4．4 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用2%戊二醛對(duì)臺(tái)面進(jìn)行清潔，并用移動(dòng)紫外燈進(jìn)行消毒。

4．5每天對(duì)使用過(guò)的移液器用75%酒精進(jìn)行擦拭。每周1次對(duì)移液器咀進(jìn)行75%酒精浸泡15分鐘左右，若使用過(guò)程中發(fā)生污染應(yīng)隨時(shí)浸泡處理。

4．6實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如發(fā)生標(biāo)本或試劑外濺，應(yīng)立即用2%戊二醛滴上，濾紙蓋上半小時(shí)，然后用酒精擦洗，并用移動(dòng)紫外燈消毒。

4．7 每天實(shí)驗(yàn)前開(kāi)啟各區(qū)的通風(fēng)系統(tǒng)，各區(qū)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，分別打開(kāi)傳遞窗紫外燈、移動(dòng)紫外燈（對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面消毒）、天花板紫外燈消毒實(shí)驗(yàn)室，每次開(kāi)啟 30～60分鐘。

4．8 待紫外燈消毒時(shí)間足夠后，依次關(guān)閉各區(qū)紫外燈并記錄。

4．9 依次清潔三個(gè)區(qū)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和地面，各區(qū)清潔消毒工具均專用，不可混用，注意按照單一方向流程的原則來(lái)進(jìn)行清潔。

4．10 處理好各區(qū)廢棄物，交醫(yī)院集中處理。

4．11 每周將工作服交院洗衣房洗滌消毒，不同實(shí)驗(yàn)區(qū)的工作服隔開(kāi)洗滌。

5. 本文涉及以下表格

實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表          

垃 圾 處 理 記 錄 表          

PCR標(biāo)本唯一標(biāo)識(shí)編號(hào)規(guī)則

1．目的：保證標(biāo)本編號(hào)的唯一性，也是準(zhǔn)確發(fā)放報(bào)告的基礎(chǔ)。

2．適用范圍：使用核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室所開(kāi)展的四種檢測(cè)項(xiàng)目：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、結(jié)核桿菌、沙眼衣原體。

3．負(fù)責(zé)人：       操作人：

4．程序：

4．1 按檢測(cè)日期分類標(biāo)記

根據(jù)標(biāo)本送檢的日期，每天的標(biāo)本對(duì)應(yīng)標(biāo)記一種唯一的代號(hào)。如當(dāng)天為2005年3月1日，則編為050301。

4．2 按檢測(cè)類型分類標(biāo)記

根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的不同，每種檢測(cè)項(xiàng)目對(duì)應(yīng)標(biāo)記一種唯一的代號(hào)。如乙型肝炎病毒標(biāo)記為B，丙型肝炎病毒標(biāo)記為HC，結(jié)核桿菌標(biāo)記為T，沙眼衣原體為C。

4．3 按驗(yàn)單接收順序編號(hào)

在同種檢測(cè)類型的驗(yàn)單中，按驗(yàn)單順序編號(hào)。如第一個(gè)檢測(cè)乙型肝炎病毒的驗(yàn)單編為B01，第二個(gè)檢測(cè)乙型肝炎病毒的驗(yàn)單編為B02，第三個(gè)檢測(cè)結(jié)核的驗(yàn)單編為B03等。

4．4 特殊標(biāo)本的編號(hào)

如有特殊情況，應(yīng)在標(biāo)記前面增加特異字母區(qū)別開(kāi)，如住院的單和門診的單、其它醫(yī)院送來(lái)的單和本醫(yī)院的單要區(qū)分開(kāi)等。

4．5 編號(hào)步驟

a）對(duì)當(dāng)天送來(lái)的標(biāo)本，根據(jù)編號(hào)的基本原則編號(hào)，每個(gè)樣本的每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目對(duì)應(yīng)一個(gè)唯一的編號(hào)（如050301T04）。

b）   用筆在每張檢驗(yàn)申請(qǐng)單和對(duì)應(yīng)的樣品管上作好相同的標(biāo)記。

c）   做好標(biāo)本的接收記錄，每個(gè)樣本的記錄都應(yīng)包括以下信息：接收時(shí)間、醫(yī)院、科室、送檢醫(yī)生、患者姓名、性別、年齡、標(biāo)本類別、標(biāo)本狀態(tài)、送標(biāo)本者、接收人、檢驗(yàn)單號(hào)、標(biāo)本唯一統(tǒng)編號(hào)等。

d）處理好樣品、點(diǎn)樣后，將反應(yīng)管放入擴(kuò)增儀上開(kāi)始擴(kuò)增。

f）擴(kuò)增得到結(jié)果后，先在統(tǒng)計(jì)簿上填入結(jié)果，作好記錄，再一一把實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入相應(yīng)申請(qǐng)單。

g）發(fā)放檢驗(yàn)報(bào)告單。

5. 本文涉及以下圖表：

PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表    

PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的要求

1．目的：規(guī)定在各區(qū)內(nèi)所進(jìn)行的工作及其操作。

2．適用范圍：所有在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行的工作。

3．負(fù)責(zé)人：      操作人：

4．程序：

實(shí)驗(yàn)室分四區(qū):標(biāo)本接收區(qū)；試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)；標(biāo)本制備區(qū)；擴(kuò)增區(qū)。進(jìn)入各區(qū)嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)——標(biāo)本接收區(qū)——標(biāo)本制備區(qū)——擴(kuò)增區(qū)。各區(qū)及其設(shè)備、物品必須有明確的標(biāo)記，嚴(yán)禁混用。

進(jìn)入PCR實(shí)驗(yàn)室的工作人員（含衛(wèi)生員），都必須遵守實(shí)驗(yàn)室的規(guī)則，尤其嚴(yán)格遵守進(jìn)入PCR實(shí)驗(yàn)室的唯一流向。不可進(jìn)入PCR擴(kuò)增后區(qū)打掃衛(wèi)生，再返回?cái)U(kuò)增前區(qū)工作。防止非本室工作人員串崗，進(jìn)入本室。尤其不得為找人，而逆向誤入PCR實(shí)驗(yàn)室。

總則

（1）       PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)具備醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、微生物檢驗(yàn)基本知識(shí)，大專以上學(xué)歷，并受過(guò)PCR實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)知識(shí)和技能培訓(xùn)。

（2）       PCR實(shí)驗(yàn)室分試劑準(zhǔn)備，樣本準(zhǔn)備，PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)四個(gè)室，各室的實(shí)驗(yàn)物品（含加樣器，試管架，吸頭，記錄紙，筆等），不得混用，須貼上標(biāo)簽予以區(qū)別。

（3）       實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須嚴(yán)格按照PCR實(shí)驗(yàn)室操作程序進(jìn)行，包括實(shí)驗(yàn)室擦洗。臺(tái)面消毒，離心管，吸頭的無(wú)菌滅活準(zhǔn)備，儀器使用和廢棄物處理等。

（4）       進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須更換各室不同的工作服（含帽和鞋），勤換洗工作服，以及遵守實(shí)驗(yàn)室的唯一流向的規(guī)定，嚴(yán)禁反向流動(dòng)。

（5）       進(jìn)入PCR實(shí)驗(yàn)室后區(qū)的物品不許帶進(jìn)PCR實(shí)驗(yàn)室前區(qū)。每天實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，必須清潔地面和消毒實(shí)驗(yàn)室前區(qū)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束應(yīng)紫外線消毒實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，產(chǎn)物分析室紫外燈最好徹夜開(kāi)啟，排風(fēng)扇應(yīng)晝夜工作。每天下班前處理好廢物，應(yīng)關(guān)好水、電、煤氣和門窗。

（6）       定期校準(zhǔn)和維修PCR儀、酶標(biāo)儀及離心機(jī)、水浴箱等儀器設(shè)備。

（7）       實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不得飲食、吸煙。

4.1標(biāo)本接收區(qū)

4.1.1實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該區(qū)須穿本區(qū)白色工作服，接收標(biāo)本須戴一次性手套。

4.1.2記錄實(shí)驗(yàn)室干、濕度，繪制冰箱溫度圖。使用帶有本區(qū)標(biāo)識(shí)的記錄本、紙和筆，每項(xiàng)記錄，書(shū)寫(xiě)工整詳細(xì)。

4.1.3對(duì)送檢的標(biāo)本實(shí)行雙簽制度，并仔細(xì)檢查是否符合檢測(cè)要求，對(duì)有不符合要求的標(biāo)本及時(shí)通知相關(guān)科室重新采樣，并作記錄，每份標(biāo)本需給出唯一性編號(hào)。

4.1.4本區(qū)所有廢棄物分類裝入垃圾袋，封好，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，將垃圾帶出實(shí)驗(yàn)室。

4.1.5每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)及地面打開(kāi)紫外燈消毒30分鐘。記錄紫外燈使用情況。

4.2試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)

4.2.5使用帶有本區(qū)標(biāo)識(shí)的記錄本、紙和筆，每項(xiàng)記錄，書(shū)寫(xiě)工整詳細(xì)。

4.2.6準(zhǔn)備好的試劑送入下一區(qū) ，還原實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，將本區(qū)所有廢棄物分類裝入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，將本區(qū)垃圾帶出實(shí)驗(yàn)室。

4.2.7白色工作服留在本區(qū)。

4.2.8本區(qū)維持相對(duì)正壓狀態(tài)（開(kāi)啟緩沖區(qū)的排氣扇）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)及地面打開(kāi)紫外燈消毒30分鐘。

4.3標(biāo)本制備區(qū)

4.3.1實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該區(qū)須在緩沖區(qū)更換專用藍(lán)色工作服及拖鞋。實(shí)驗(yàn)中須使用一次性帽子，戴手套，手套在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中疑有污染應(yīng)立即更換。

4.3.2將傳入本區(qū)的試劑放入冰箱冷凍室試劑存放專區(qū)暫存。記錄實(shí)驗(yàn)室干、濕度，繪制冰箱溫度圖。

4.3.3將冰箱內(nèi)二周前的標(biāo)本密封丟入垃圾筐，然后記錄標(biāo)本的保存情況。

4.3.4使用帶有本區(qū)標(biāo)識(shí)的記錄本、紙和筆，每項(xiàng)記錄，書(shū)寫(xiě)工整詳細(xì)。

4.3.5按試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行處理，將處理好的標(biāo)本在超凈工作臺(tái)內(nèi)加樣，記錄標(biāo)本的處理過(guò)程。

4.3.6將加樣后的試劑傳送下一區(qū)，還原實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，關(guān)閉所有儀器，記錄儀器使用時(shí)間和運(yùn)行狀態(tài)。

4.3.7使用過(guò)的離心管、吸頭須置于盛有10％84液的廢液缸中，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后方丟入垃圾袋，患者樣品應(yīng)按有生物傳染性危險(xiǎn)品對(duì)待。

4.3.8將本區(qū)所有廢棄物分類裝入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，將垃圾帶出本區(qū)。

4.3.9將藍(lán)色工作服留在本區(qū)。

4.3.10本區(qū)應(yīng)避免不必要的走動(dòng)，同時(shí)維持相對(duì)正壓狀態(tài)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)及地面打開(kāi)紫外燈消毒30分鐘。

4.4擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)區(qū)

4.4.1實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該區(qū)須在緩沖區(qū)更換專用粉色工作服及拖鞋。

4.4.2記錄實(shí)驗(yàn)室干、濕度，繪制冰箱溫度圖。

4.4.3使用帶有本區(qū)標(biāo)識(shí)的記錄本、紙和筆，每項(xiàng)記錄，書(shū)寫(xiě)工整詳細(xì)。

4.4.4將傳入本區(qū)加樣后的試劑上機(jī)擴(kuò)增。

4.4.5擴(kuò)增完成后，記錄檢測(cè)結(jié)果，及時(shí)發(fā)放報(bào)告單，記錄儀器使用時(shí)間和運(yùn)行狀態(tài)。

4.4.6將本區(qū)所有廢棄物分類裝入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，然后將垃圾帶出實(shí)驗(yàn)室。

4.4.7將粉色工作服留在本室再離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室

4.4.8嚴(yán)禁本區(qū)物品帶至其他區(qū)，該區(qū)需維持負(fù)壓狀態(tài)，排氣扇24小時(shí)排氣，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后清潔該區(qū)打開(kāi)紫外燈照射，最好整夜消毒，記錄紫外燈使用情況。

5. 本文涉及以下表格

PCR實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫濕度記錄表        

冰箱溫度質(zhì)控圖                    

實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表              

垃 圾 處 理 記 錄 表             

紫外消毒車消毒記錄表              

PCR廢棄物的處理程序

1．目的：保證實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)人員和外部環(huán)境的安全。

2．適用范圍：核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用化學(xué)試劑（NaOH、EDTA、乙醇、生理鹽水等）、實(shí)驗(yàn)室廢棄物的處理；

3．負(fù)責(zé)人：        操作人：

4．細(xì)則：

4.1科室職責(zé)應(yīng)對(duì)本室工作人員講明本程序在預(yù)防交叉、實(shí)驗(yàn)室污染及切斷傳播途徑中的重要性，并要求嚴(yán)格執(zhí)行。

4.2實(shí)驗(yàn)室所有垃圾，裝入專用污物袋內(nèi)，各區(qū)備有：生活垃圾袋（黑色）及生物污染垃圾袋（黃色）。使用過(guò)的一次性消耗品(如試管、吸頭、離心管、等)，先放入10%次氯酸鈉溶液中浸泡2～4小時(shí)后，再放入黃色垃圾袋內(nèi)，使用過(guò)的手套、鞋套等直接放入黃色垃圾袋內(nèi)交醫(yī)院集中處理。

4.3 夾取標(biāo)本的工具，如鉗、鑷、接種環(huán)、吸管等，用后均應(yīng)消毒清潔，進(jìn)行微生物檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)重新滅菌，金屬工具可燒灼滅菌或消毒液浸泡；玻璃制品干熱或壓力蒸汽滅菌。

4.4 一次性塑料痰盂，用2%戊二醛液浸泡2～4小時(shí)后，放入黃色垃圾袋內(nèi)交醫(yī)院集中處理。

4.5 廢棄標(biāo)本如血、尿、胸水、腹水、腦脊液、唾液、胃液、腸液、關(guān)節(jié)腔液等用10%的84液浸泡2～4小時(shí)后，交醫(yī)院集中處理。

4.6 盛標(biāo)本的容器，若為一次性使用的紙質(zhì)容器及其外面包被的廢紙，放入污物袋里交醫(yī)院處理；對(duì)可再次使用的玻璃、塑料或搪瓷容器，煮沸15分鐘或加入10%次氯酸鈉溶液浸泡2～4小時(shí)，消毒液每日更換，消毒后用洗滌劑及流水刷洗，瀝干，用于微生物培養(yǎng)采樣者，用壓力蒸汽滅菌后備用。

4.7 廢棄標(biāo)本及其容器裝入黃色垃圾袋內(nèi)、封閉，交醫(yī)院污物處理中心處理。

4.8日常生活垃圾如紙屑等按一般垃圾交醫(yī)院處理。

5. 本文涉及以下表格

PCR廢血標(biāo)本處理交接表                

基因擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)及結(jié)果分析

1、目的：保證擴(kuò)增及結(jié)果分析的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化。

2．適用范圍：適用于本室使用的普通離心機(jī)。

3．負(fù)責(zé)人：肖靜  操作人：胡可存  蔣藝勤

4、標(biāo)準(zhǔn)程序：

4.1 基因擴(kuò)增檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)程序：擴(kuò)增反應(yīng)前須先在樣本輸入模板上按照事先排好的標(biāo)本位置進(jìn)行設(shè)置。每次實(shí)驗(yàn)除待檢標(biāo)本，還需包括：陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、室內(nèi)質(zhì)控品各一份，一組陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品（4個(gè)梯度10⁸、10⁶、10⁵、10⁴）。

4.1.1打開(kāi)電腦電源開(kāi)關(guān)，進(jìn)入Windows NT界面。

4.1.2 接著打開(kāi)PCR儀電源開(kāi)關(guān)，預(yù)熱5分鐘。 

4.1.3雙擊電腦桌面的ABI Prism 5700 SDS Software圖標(biāo)進(jìn)入程序設(shè)置界面。

4.1.4單擊 “文件”菜單中的 “新建”命令，（或單擊工具欄中的“新建”按扭）。在測(cè)定、容器和模板中做相應(yīng)的選擇，點(diǎn)擊OK。

4.1.5應(yīng)用檢測(cè)管理程序，并將其添加到樣品板文檔中。

4.1.6檢測(cè)反應(yīng)管，

4.1.7 根據(jù)當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需條件編輯時(shí)間和溫度。運(yùn)行樣品板文檔。

4.2 結(jié)果分析標(biāo)準(zhǔn)程序 ：

應(yīng)按以下步驟進(jìn)行：全部曲線——陰性對(duì)照——陽(yáng)性對(duì)照——陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品——陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品——逐個(gè)分析（標(biāo)出陽(yáng)性標(biāo)本和可疑標(biāo)本）——調(diào)整參數(shù)，獲得較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，顯示定量結(jié)果——登記，發(fā)報(bào)告。

4.2.1 整體曲線的觀察：將所有曲線選中進(jìn)行整體觀察

1）觀察是否存在污染情況（包括標(biāo)本污染和試劑污染），特別應(yīng)注意大量曲線

在同一Ct值出現(xiàn)上漲的情況。

2）觀察是否有光路傳導(dǎo)阻滯或電壓波動(dòng)等機(jī)器原因形成的異常曲線。

4.2.2 陰性對(duì)照的分析

陰性對(duì)照：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知陰性標(biāo)本。

作用：用以監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室和前處理過(guò)程中是否存在污染。

4.2.3 陽(yáng)性對(duì)照的分析

陽(yáng)性對(duì)照：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知陽(yáng)性標(biāo)本。

作用：用以監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)?zāi)芊裾�常檢出陽(yáng)性標(biāo)本，避免假陰性的出現(xiàn)。

4.2.4 室內(nèi)質(zhì)控品的分析

室內(nèi)質(zhì)控品：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知濃度室內(nèi)質(zhì)控品。

作用：用以監(jiān)控日常實(shí)驗(yàn)的精密度。

4.2.5 陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品的分析

1）各梯度曲線的分布是否均勻，若各梯度曲線均未分開(kāi)，則表明陽(yáng)模稀釋可能存在問(wèn)題，提示實(shí)驗(yàn)中存在較大人為誤差。

2）觀察各曲線的Ct值是否在平日的正常位置。

情況1：若出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而各曲線Ct 值均后移，則判斷是否為試劑擴(kuò)增效率下降（如試劑過(guò)期或保存條件不合格）。

情況2：出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而高拷貝曲線Ct值均正常，則提示可能存在低拷貝陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品的降解情況。

3）每日必做10⁴標(biāo)準(zhǔn)品，用作以下三方面監(jiān)控：一是否存在操作誤差，如加樣量過(guò)少等原因?qū)е?0⁴標(biāo)準(zhǔn)品未能檢出；二是否存在稀釋后的梯度放置過(guò)久，低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品降解的情況；三是若高拷貝標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)Ct值后移，且能排除情況1、2，則判斷是否為試劑靈敏度下降。

4.2.6 單個(gè)曲線的判斷：逐個(gè)分析每條曲線，判斷曲線的陰陽(yáng)性或?qū)倏梢汕�線。（可疑標(biāo)本是指曲線在25個(gè)Ct值后出現(xiàn)上漲且平臺(tái)趨勢(shì)不明顯或上漲幅度比較低的標(biāo)本。可疑標(biāo)本要第二天重做，兩次結(jié)果一致則報(bào)陽(yáng)性，否則結(jié)果報(bào)陰性。）

曲線觀察內(nèi)容：在基線選擇2～8時(shí)觀察熒光強(qiáng)度（是否有三期特征）。并分別在Delta Rn vs.Cycle 、Ct vs.Well Number和 Rn vs.Cycle這三種擴(kuò)增圖形式下分析數(shù)據(jù)。

4.2.7 得出定量結(jié)果：調(diào)節(jié)基線和閾值以得到一較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。電腦據(jù)此曲線給出陽(yáng)性結(jié)果值。此時(shí)應(yīng)排除某些陰性標(biāo)本因熒光曲線假性上揚(yáng)而得出的假陽(yáng)性結(jié)果和某些弱陽(yáng)性標(biāo)本因終末熒光值過(guò)低而顯示的假陰性。

4.2.8 發(fā)放報(bào)告：及時(shí)登記檢測(cè)結(jié)果記錄，發(fā)放臨床報(bào)告。

4.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)效的判斷標(biāo)準(zhǔn)：出現(xiàn)下述四種情況中的任何一種或多種，當(dāng)次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可發(fā)，查找原因，重做實(shí)驗(yàn)。

4.3.1 陰性對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增。

4.3.2 陽(yáng)性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增。

4.3.3大批甚至所有的標(biāo)本都擴(kuò)增了。

4.3.4 室內(nèi)質(zhì)控血清檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)失控情況，實(shí)驗(yàn)失控的具體標(biāo)準(zhǔn)詳見(jiàn)室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序。

4.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效的判斷標(biāo)準(zhǔn)：達(dá)到下列要求后，當(dāng)次實(shí)驗(yàn)有效，可以發(fā)放結(jié)果。

4.4.1陰性對(duì)照沒(méi)有擴(kuò)增，陽(yáng)性對(duì)照擴(kuò)增。

4.4.2陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品梯度曲線平滑均勻，斜率、截距和相關(guān)系數(shù)三個(gè)參數(shù)的數(shù)值均在范圍內(nèi)。

4.4.3室內(nèi)質(zhì)控血清檢測(cè)結(jié)果處于在控狀態(tài)，具體標(biāo)準(zhǔn)詳見(jiàn)

5. 本文涉及以下表格

室間質(zhì)評(píng)記錄表                        

PCR室內(nèi)質(zhì)控記錄表                  

室內(nèi)質(zhì)控圖                         

臨床標(biāo)本的保存操作程序

1．目的：臨床標(biāo)本正確保存，以便必要時(shí)復(fù)查。

2．適用范圍：分子診斷室的所有臨床檢測(cè)標(biāo)本。

3．負(fù)責(zé)人：       操作人：

4．程序：

4．1 處理前的標(biāo)本保存

a）HBV：全血標(biāo)本可4℃下短期（24h內(nèi)）保存，長(zhǎng)期保存則需分離出血清（血漿），保存于-20℃下。

d）HCV：在1小時(shí)內(nèi)分離血清，吸取200µl，加入20u Rnasin，保存于-20℃。盡可能快的提取RNA。

c）TB：痰或胸腹水、腦脊液、膿液標(biāo)本用于TB檢測(cè)的短期保存可置于4℃下，長(zhǎng)期保存則于-20℃下。

d）CT：標(biāo)本短期（24h內(nèi)）保存置于4℃下，長(zhǎng)期保存則需在-20℃下。

4．2 報(bào)告發(fā)出后的標(biāo)本保存：

a） 提取的核酸標(biāo)本當(dāng)天檢測(cè)可置4℃保存，如當(dāng)天不檢測(cè)應(yīng)置-20℃保存。報(bào)告發(fā)出后第二天丟棄。

b） 原始血清/血漿樣本在報(bào)告發(fā)出后放入低溫冰箱-20℃保存1個(gè)星期，以備復(fù)查。超過(guò)1個(gè)星期保存期的標(biāo)本由室負(fù)責(zé)人酌情處理，一般按生物傳染性物品交醫(yī)院統(tǒng)一處理。

c）血清/血漿標(biāo)本放置低溫冰箱保存時(shí)須有記錄，按編號(hào)順序存放，并由專人負(fù)責(zé)管理。

4．3 特殊標(biāo)本的處理：

對(duì)暫不檢測(cè)的項(xiàng)目和規(guī)定時(shí)間外收到的零散樣本，要隨時(shí)登記和交班，以免漏檢，遺失和延誤檢驗(yàn)。對(duì)特殊樣本或特殊病人的樣本，實(shí)行“首接”負(fù)責(zé)制，所謂特殊樣本是指難于采集的樣本，以及特殊病人的樣本一律實(shí)行“首接”負(fù)責(zé)制，無(wú)論那位工作人員，一旦收到樣本后，均須負(fù)其責(zé)任，不得以任何借口推托，及時(shí)和正確保管和轉(zhuǎn)送樣本到有關(guān)實(shí)驗(yàn)室或有關(guān)人員，同時(shí)作交班記錄和雙簽名。對(duì)于做長(zhǎng)期病情動(dòng)態(tài)考察的病人標(biāo)本一律置于-20℃下長(zhǎng)期保存，使用時(shí)再按需取出檢測(cè)。

5. 本文涉及以下圖表：

PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表                  

拒收標(biāo)本記錄本                         

標(biāo)本超低溫保存記錄表                 

臨床標(biāo)本的采集、運(yùn)送、接收程序

1．目的：規(guī)范臨床待檢標(biāo)本的正確采集、送檢和處理。

2．適用范圍：分子診斷室的所有臨床檢測(cè)標(biāo)本。

3．負(fù)責(zé)人：      操作人：

4．程序：

4．1 標(biāo)本的采集

4．1．1 標(biāo)本由臨床各科室接受過(guò)臨床基因擴(kuò)增檢測(cè)有關(guān)標(biāo)本采集、保存、運(yùn)輸知識(shí)培訓(xùn)的醫(yī)護(hù)人員采集并送至實(shí)驗(yàn)室。

4．1．2標(biāo)本采集要求

a）血液標(biāo)本：用2ml真空采集管或1.5ml高壓滅菌離心管采集血液標(biāo)本，血標(biāo)本采集后在2小時(shí)內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室（HCV采用EDTA抗凝的血漿）。離心（檢驗(yàn)單與標(biāo)本一道）后用一次性吸管吸取血清或血漿加入經(jīng)消毒的1.5ml的離心管中，編號(hào)。

b）痰標(biāo)本：用帶蓋的無(wú)菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰標(biāo)本送檢。（對(duì)于無(wú)痰或少痰的患者，可用45℃加溫的100g/L NaCl水溶液霧化吸入或改變體位以使痰液易于咳出；對(duì)于小兒可以輕壓胸骨柄上方以誘導(dǎo)咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集標(biāo)本。）標(biāo)本在室溫下保存不能超過(guò)24小時(shí)。

c）生殖道拭子：尿道或陰道分泌物由醫(yī)生用專用取樣拭子（滅菌，一次性）采集樣本，及時(shí)送檢。采集生殖道拭子標(biāo)本，要求男性病人在采樣前2小時(shí)內(nèi)不能排尿，采樣時(shí)，將棉拭子伸入男性尿道及女性宮頸口2～3cm，轉(zhuǎn)動(dòng)一周以獲得上皮細(xì)胞。

d）尿液：由病人自留尿液于無(wú)菌封閉的杯中送檢。

e）腦脊液和胸腹水：由臨床醫(yī)生采集后放入消毒的試管中及時(shí)送檢。

注意：所有上述用于臨床標(biāo)本采集的容器如試管或離心管，均應(yīng)使用前高壓滅菌和密封。

4．2 標(biāo)本的運(yùn)送

標(biāo)本采集后，密閉、標(biāo)（貼）姓名，應(yīng)盡可能快的送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，如運(yùn)送時(shí)間需2小時(shí)以上，必須用冰盒送至實(shí)驗(yàn)室。

標(biāo)本中如加入了適當(dāng)?shù)姆�(wěn)定劑，如用于RNA測(cè)定加入4mol/L異硫氰酸胍鹽（GITC）的血清（漿）標(biāo)本和用于DNA測(cè)定的EDTA抗凝血等，則可在室溫下運(yùn)送或郵寄。

4．5 接收

4．5．1嚴(yán)格對(duì)各類樣本的查對(duì)和雙簽制度，對(duì)病房各樣本及時(shí)進(jìn)行驗(yàn)收，查對(duì)，不符合要求的樣本一律退回，并有書(shū)面記錄。

4．5．2 分類驗(yàn)證

4．5．2．1 一般內(nèi)容

進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的樣本在進(jìn)行編號(hào)、離心前，工作人員應(yīng)再次認(rèn)真查對(duì)姓名，聯(lián)號(hào)，住院號(hào)，病區(qū)床號(hào)，項(xiàng)目等。對(duì)不符合要求者應(yīng)作記錄，并及時(shí)通知采樣科室，正確及時(shí)地補(bǔ)采樣，以免延誤病人的檢測(cè)結(jié)果報(bào)告。對(duì)書(shū)寫(xiě)不清楚的申請(qǐng)單，當(dāng)事者要及時(shí)與病房聯(lián)系(可電話)，明確受檢者姓名，住院號(hào)，性別，年齡，病區(qū)，床號(hào)和檢驗(yàn)項(xiàng)目等；并作相應(yīng)記錄。

4．5．2．2  按檢測(cè)項(xiàng)目驗(yàn)證標(biāo)本

a）HBV：所需標(biāo)本類型為未溶血的血清或血漿，注意血漿標(biāo)本所用的抗凝劑，用EDTA-K₂，不可使用肝素。標(biāo)本為全血時(shí)應(yīng)及時(shí)分離出血漿保存。

b）HCV：同上，但標(biāo)本為血清時(shí)，要在1小時(shí)內(nèi)分離出血清用于檢測(cè)。

c）TB：晨起第一口深部痰(不能為唾液)、胸腹水、腦脊液、膿液或穿刺液。

d）CT：尿道或陰道分泌物。

4．5．2．3 實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)標(biāo)本進(jìn)行查驗(yàn)，出現(xiàn)下表中不合要求的情況時(shí)，應(yīng)拒收標(biāo)本，登記并告知相關(guān)科室。

4．5．2．4 拒收程序

a）對(duì)拒收的不合格標(biāo)本應(yīng)在拒收標(biāo)本記錄本上登記。

b）填寫(xiě)不合格標(biāo)本處置單，并隨同申請(qǐng)單送返送檢科室。

c）必要時(shí)電話告之相關(guān)科室醫(yī)生或護(hù)士。

5.  本文涉及以下圖表：

PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表          

PCR擴(kuò)增拒收標(biāo)本記錄表         

PCR生物安全防護(hù)措施

1．目的：預(yù)防工作人員在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中被感染或污染。

2．適用范圍：適用于本室所有工作人員。

3．負(fù)責(zé)人：     操作人：

4．細(xì)則：

4．1  實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)施生物防護(hù)措施時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守各項(xiàng)相應(yīng)的規(guī)章制度，建立起強(qiáng)烈的生物防護(hù)意識(shí)。

4．2  每天更換廢液缸的2%戊二醛溶液，并保證2%戊二醛溶液用量為廢液缸內(nèi)總液量的五分之一左右。配置消毒液時(shí)，正確量取足量的消毒劑（用量杯，保證濃度），水的用量也要正確，缸體密封性良好。

4．3  實(shí)驗(yàn)臺(tái)面日常清潔時(shí)使用75%的酒精擦拭。

4．4  每區(qū)每次實(shí)驗(yàn)后紫外燈照射30～60分鐘，如有需要可延長(zhǎng)照射時(shí)間。

4．5  所有來(lái)自病人的血液或體液標(biāo)本均應(yīng)視作傳染源，因此在標(biāo)本的采集、運(yùn)輸過(guò)程中，標(biāo)本容器應(yīng)完好無(wú)泄漏。

4．6  處理標(biāo)本時(shí)應(yīng)穿工作服、戴手套，以免沾上皮膚。如手或其它部位的皮膚沾上血液或體液標(biāo)本以及試劑，應(yīng)立即沖洗干凈。有下列情況之一者，需另外消毒：手接觸有傳染性的微生物，水龍頭、水池肥皂可能被污染，工作服可能被大量細(xì)菌污染。消毒劑可用“84”消毒液。

4．7  在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，病人標(biāo)本（血液、體液）或試劑不慎濺入眼內(nèi)應(yīng)立即用清水洗。

4．8  實(shí)驗(yàn)過(guò)程中在使用針具等銳器時(shí)，盡量小心防止受傷。若被銳器刺破時(shí)，應(yīng)立即脫下手套，盡量擠壓傷處，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要時(shí)進(jìn)行預(yù)防補(bǔ)救措施。

4．9  在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中病人標(biāo)本（血液、體液）外漏時(shí)，應(yīng)立即用2%戊二醛滴上，濾紙或紗布蓋上半小時(shí)，然后用酒精擦洗，并用紫外燈消毒。

4．10 實(shí)驗(yàn)完畢離開(kāi)時(shí)，應(yīng)脫下所有該實(shí)驗(yàn)區(qū)個(gè)人防護(hù)裝備。

4．11 實(shí)驗(yàn)完畢后應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行紫外消毒。

4．12 遇有意外事故應(yīng)立即報(bào)告科室負(fù)責(zé)人，當(dāng)事人應(yīng)立即注射相關(guān)疫苗或進(jìn)行預(yù)防性治療，并進(jìn)行醫(yī)學(xué)觀察，嚴(yán)重者應(yīng)報(bào)告院技術(shù)負(fù)責(zé)人。

5. 本文涉及以下表格

紫外消毒車消毒記錄表         

實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表         

PCR實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑配制程序

1．目的：保證實(shí)驗(yàn)中用到的各種溶液符合實(shí)驗(yàn)要求。

2．適用范圍：核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用溶液：4%NaOH溶液、75%酒精、消毒劑（三氯異氰尿酸或 二氯異氰尿酸鈉）、2%戊二醛溶液等。

3．負(fù)責(zé)人：      操作人：

4．程序：

4．4 化學(xué)試劑的配制：

4．4．1 用具：干燥潔凈的250ml量桶一只，1000ml量桶一只，1000ml燒杯一只，三角燒瓶?jī)芍唬�天平一架�?00ml塑料試劑瓶、2000ml廣口瓶各一只。

4．4．2 配制步驟：

4．4．2．1 配制4%NaOH溶液:

a）用天平稱取4克分析純的NaOH固體，置于一只三角燒瓶中。

b）用250ml量桶準(zhǔn)確取100ml水，緩緩注入盛放NaOH固體的三角燒瓶中。

c）搖蕩三角燒瓶使NaOH固體充分溶解。

d）然后緩緩傾倒入100ml塑料試劑瓶中密封保存?zhèn)溆谩?/P>

4．4．2．2 配制消毒劑:

a）一般桌面、器具和地面的消毒只要使有效氯達(dá)到500mg/L，即可達(dá)到消毒作用。

b）消毒劑為粉狀（20克/袋），如配制一升的消毒劑溶液，則取500g，倒入燒杯中，緩緩加入1000ml水充分溶解，備用。

c）如需加大消毒力度，則有效氯濃度加大。

4．4．2．3 配制75%酒精溶液:

a）一般常規(guī)消毒的75%酒精由醫(yī)院藥劑科提供。

b）RNA提取的75%酒精的配制，試劑盒提供DEPC水，酒精用分析純的無(wú)水酒精，根據(jù)當(dāng)天的標(biāo)本數(shù)量進(jìn)行配制。

4．4．2．4 配制2%戊二醛溶液:

a）準(zhǔn)確量取戊二醛原液20ml倒入1000ml燒杯中。

b）量取980ml水，緩緩倒入1000ml燒杯中，混勻，加至2000ml廣口瓶中備用。

注意事項(xiàng)：每份配制好的溶液保質(zhì)期為14天

PCR實(shí)驗(yàn)室記錄管理制度

1、目的：確保檢驗(yàn)資料的記錄、保存狀態(tài)在控

2、適用范圍：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)、文本資料的記錄

3．負(fù)責(zé)人：         操作人：

4、工作程序：

4.1  書(shū)面記錄文件的管理：

4.1.1 本實(shí)驗(yàn)室的書(shū)面記錄包括：

001 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室平面圖------------編號(hào)ABCD/001

002實(shí)驗(yàn)室主要負(fù)責(zé)人簡(jiǎn)歷表-----------------------------編號(hào)ABCD/002

003PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表----------------------------編號(hào)ABCD/003

004PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表------------------------------編號(hào)ABCD/004

005拒收標(biāo)本記錄本-------------------------------------編號(hào)ABCD/005

006標(biāo)本超低溫保存記錄表-------------------------------編號(hào)ABCD/006

007PCR試劑購(gòu)買記錄表----------------------------------編號(hào)ABCD/007

008試劑驗(yàn)收記錄表-------------------------------------編號(hào)ABCD/008

009PCR室特殊耗材驗(yàn)收記錄表----------------------------編號(hào)ABCD/009

010普通耗材驗(yàn)收記錄表---------------------------------編號(hào)ABCD/010

011室間質(zhì)評(píng)記錄表-------------------------------------編號(hào)ABCD/011

012PCR室內(nèi)質(zhì)控記錄表----------------------------------編號(hào)ABCD/012

013室內(nèi)質(zhì)控圖-----------------------------------------編號(hào)ABCD/013

014 PCR實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫濕度記錄表-------------------------編號(hào)ABCD/014

015冰箱溫度質(zhì)控圖-------------------------------------編號(hào)ABCD/015

016儀器使用記錄表-------------------------------------編號(hào)ABCD/016

017儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表---------------------------編號(hào)ABCD/017

018紫外消毒車消毒記錄表-------------------------------編號(hào)ABCD/018

019應(yīng)急處理登記表-------------------------------------編號(hào)ABCD/019

020 PCR廢血標(biāo)本處理交接表-----------------------------編號(hào)ABCD/020

021垃圾處理記錄表-------------------------------------編號(hào)ABCD/021

022實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表-------------------------------編號(hào)ABCD/022

023 PCR檢驗(yàn)報(bào)告單-------------------------------------編號(hào)ABCD/023

024耗材進(jìn)購(gòu)記錄表-------------------------------------編號(hào)ABCD/024

025試劑耗材供應(yīng)商一覽表-------------------------------編號(hào)ABCD/025

4.1.2 填寫(xiě)書(shū)面記錄，需使用黑色墨水或圓珠筆，字跡清晰，如有涂改，在涂改處應(yīng)有涂改人簽名，不得在記錄表上進(jìn)行無(wú)關(guān)書(shū)寫(xiě)，保持記錄表清潔、完整。實(shí)驗(yàn)記錄表嚴(yán)格專用，不同實(shí)驗(yàn)區(qū)不得混用。

4.1.3 每個(gè)記錄本要納入檔案管理，寫(xiě)完后及時(shí)放入檔案柜，每月分類裝訂成冊(cè),并依照要求進(jìn)行編號(hào),如2003年5月的實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄本、試劑消耗記錄本、室內(nèi)質(zhì)控圖分別編為200305SYJG、200305SJXH、200305SLZK，分別放于檔案柜的不同位置以便查詢。標(biāo)本原始檢測(cè)申請(qǐng)單最后保存于倉(cāng)庫(kù)2年，其它實(shí)驗(yàn)記錄保存于各自實(shí)驗(yàn)操作區(qū)內(nèi)，保存5年。

4.1.4 定期對(duì)保存的記錄進(jìn)行分析總結(jié)，形成總結(jié)報(bào)告，以便改進(jìn)工作。

4.1.5 在沒(méi)有實(shí)驗(yàn)室職責(zé)同意的情況下，不得隨意將記錄借出。在記錄借出時(shí)需有實(shí)驗(yàn)室職責(zé)、經(jīng)手人、借閱人的簽名方可。

4.2 電腦上記錄文件的管理

4.2.1記錄文件必須保存在非系統(tǒng)分區(qū)中，如D盤(pán)，保存路徑要清晰、便捷、易查找。

4.2.2文件夾目錄結(jié)構(gòu)要求層次分明，一整年的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均保存在一個(gè)年度文件夾里，如“2003年”文件夾；每個(gè)年度文件夾包含12個(gè)月文件夾，如“Jan01”、“Feb02”，每天的實(shí)驗(yàn)結(jié)果就保存在當(dāng)月文件夾里。

4.2.3 實(shí)驗(yàn)文件保存時(shí)以當(dāng)天日期命名，若某天進(jìn)行了多, 次實(shí)驗(yàn)，命名時(shí)在后面以a、b、c等字母標(biāo)識(shí)，如2003年5月8日做的兩次實(shí)驗(yàn)，分別保存為20030508a和20030508b。

4.2.4為了防止儲(chǔ)存實(shí)驗(yàn)結(jié)果的電腦發(fā)生系統(tǒng)崩潰、硬件故障等問(wèn)題導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果丟失、無(wú)法查詢等情況，每個(gè)月的實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄文件都要用移動(dòng)存儲(chǔ)設(shè)備（如軟盤(pán)、USB硬盤(pán)等）拷貝到另一部PC機(jī)上做備份；一年的數(shù)據(jù)要用刻錄機(jī)刻制一張CD光盤(pán)備份儲(chǔ)存，貼上標(biāo)簽，如“2003年實(shí)驗(yàn)結(jié)果備份”,放入檔案柜妥善存放。

PCR應(yīng)急處理程序

1．目的：在實(shí)際工作中，儀器設(shè)備發(fā)生故障、試劑盒發(fā)生質(zhì)量問(wèn)題時(shí)，為保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、及時(shí)，應(yīng)正確采取應(yīng)急措施，最大程度上避免或減輕不利影響。

2．適用范圍：適用于滿足核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)需要并可能對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果造成誤差的儀器設(shè)備和試劑盒。

3．負(fù)責(zé)人：

4．細(xì)則：

4．1 核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室工作人員在職責(zé)范圍內(nèi)均有責(zé)任熟悉各種儀器和相關(guān)設(shè)備的性能、要求、維護(hù)和保養(yǎng)、常見(jiàn)故障的排除、尤其要嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作。

4．2 工作人員在職責(zé)范圍內(nèi)均有責(zé)任有意識(shí)地注意以求及時(shí)發(fā)現(xiàn)并報(bào)告儀器設(shè)備和試劑盒的異常情況。

4．3 作為應(yīng)急處理，潛在著一定的可能影響檢測(cè)質(zhì)量的不確定因素。室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)在第一時(shí)間檢查核實(shí)應(yīng)急措施的有效性。

4．4 儀器設(shè)備故障

4．4．1 室負(fù)責(zé)人接到異常情況報(bào)警后，立即現(xiàn)場(chǎng)確認(rèn)異常情況的性質(zhì)：觀察有誤、誤操作、偶發(fā)現(xiàn)象或確屬不能立即排除的故障。

4．4．2 用紅牌故障標(biāo)志標(biāo)示故障儀器，以防被錯(cuò)誤使用。

4．4．3有滿足要求的替用設(shè)備的，啟用替用設(shè)備（準(zhǔn)用儀器）。借用其他部門儀器設(shè)備時(shí)，及時(shí)聯(lián)系借用并核實(shí)該設(shè)備的使用狀態(tài)。替用、借用或備用設(shè)備的使用在滿足質(zhì)量要求的同時(shí)，必須同時(shí)滿足實(shí)驗(yàn)室管理措施（特別是防污染）的要求。

4．4．4不能解決的問(wèn)題，應(yīng)及時(shí)與供應(yīng)方會(huì)同解決。根據(jù)雙方合同約定，及時(shí)通知供應(yīng)方。供應(yīng)方技術(shù)支持人員將在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)隨身攜帶備用設(shè)備到達(dá)現(xiàn)場(chǎng)。

4．4．5儀器維修后，必須經(jīng)驗(yàn)收合格并供需雙方簽字，調(diào)試實(shí)驗(yàn)通過(guò)后才能重新啟用。取下紅色故障標(biāo)示（暫停使用），換上藍(lán)色正常標(biāo)示（正常使用）。

4．4．6 室主任須檢查并隨時(shí)跟蹤所采取措施的有效性。

4．4．7對(duì)未能及時(shí)排除故障時(shí)，必須及時(shí)上報(bào)科室，在科主任批準(zhǔn)下，應(yīng)積極聯(lián)系附近的其他已得到衛(wèi)生部臨檢中心認(rèn)證的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，以滿足病人和臨床或科研需求。

4．5 試劑盒質(zhì)量發(fā)生問(wèn)題，經(jīng)核實(shí)后，及時(shí)通知供貨商迅速更換另一批次試劑，使用前需先作質(zhì)量檢測(cè)，合格后方可使用。

4．6 儀器設(shè)備故障或試劑質(zhì)量問(wèn)題不能得到解決，預(yù)期將會(huì)影響到檢測(cè)報(bào)告的及時(shí)發(fā)出，可將標(biāo)本送至其它已得到衛(wèi)生部臨檢中心認(rèn)證的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查；如已影響到報(bào)告的及時(shí)發(fā)出，應(yīng)在門診取報(bào)告處向病人公告或向相關(guān)病區(qū)公告，取得病人的諒解。

4．7  影響到檢測(cè)報(bào)告發(fā)出的情況，應(yīng)在應(yīng)急處理記錄表作記錄。

5. 本文涉及以下表格：

應(yīng)急處理記錄表        

試劑的質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序

1．目的：保證每批用于臨床實(shí)驗(yàn)的試劑的質(zhì)量良好，符合要求。

2．適用范圍：各種用于臨床實(shí)驗(yàn)的核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑（HBV、HCV、TB、CT）。

3．負(fù)責(zé)人：      操作人：

4．程序：

4．1 收到試劑后，目測(cè)試劑是否處在凍存狀態(tài)。

4．2 核對(duì)試劑品種和數(shù)量并檢查包裝：外包裝（廠名廠址、、批準(zhǔn)文號(hào)、批號(hào)和有效期等）；內(nèi)包裝（試劑瓶完整性、試劑配備品種完整性、使用說(shuō)明書(shū)有否等）。

4．3 及時(shí)將試劑轉(zhuǎn)入－20℃冰箱保存。將上述檢測(cè)核對(duì)情況在記錄本上登記。

4．4 最遲在前批次試劑存量尚可維持常規(guī)實(shí)驗(yàn)一周時(shí)，按如下要求對(duì)新批號(hào)試劑進(jìn)行效驗(yàn)實(shí)驗(yàn)。

4．5 效驗(yàn)實(shí)驗(yàn)：

4．5．1 要求設(shè)置：空白對(duì)照、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、室內(nèi)質(zhì)控各一，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品梯度（10⁴、10⁵、10⁶、10⁸）。

4．5．2 出現(xiàn)如下情況中任何一種的，判斷為試劑不合格，不能用于臨床檢測(cè)：

a）空白對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增。如擴(kuò)增曲線CT值大于25，需重復(fù)實(shí)驗(yàn)確證試劑污染。

b）陽(yáng)性對(duì)照和陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品均未檢出，或陽(yáng)性對(duì)照未檢出而陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品檢出率大幅下降，表示試劑失效或檢測(cè)靈敏度大幅下降。

4．5．3 陽(yáng)性對(duì)照未檢出，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)正常，提示樣品提取液可能存在問(wèn)題。重復(fù)新舊提取液陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，確定提取液失效問(wèn)題。更換提取液后該批試劑方可使用。

4．5．4 空白對(duì)照無(wú)擴(kuò)增，陰性對(duì)照有擴(kuò)增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。單獨(dú)用提取液點(diǎn)樣上機(jī)，出現(xiàn)擴(kuò)增，需更換提取液后方可使用該批試劑。

4．5．5 陽(yáng)性對(duì)照檢出，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品未檢出或擴(kuò)增曲線明顯系統(tǒng)性CT值偏大5個(gè)循環(huán)以上。提示陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品存在問(wèn)題。更換陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品后該批試劑方可投入使用。

4．5．6空白對(duì)照、陰性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增，陽(yáng)性對(duì)照正常檢出，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品導(dǎo)出的標(biāo)準(zhǔn)曲線之斜率（－2.9～－3.9）、截距（26～34）、相關(guān)性（﹤－0.99）均在使用范圍內(nèi)，表明該批試劑良好，可以投入臨床使用。

4．6 將實(shí)驗(yàn)結(jié)果歸入記錄。

5.      本文涉及以下圖表

PCR試劑購(gòu)買記錄表         

試劑驗(yàn)收記錄表

PCR消耗品進(jìn)購(gòu)、質(zhì)檢、貯存程序

1、目的：保證實(shí)驗(yàn)消耗品的質(zhì)量、合理配用及存放

2、范圍： 1.5ml離心管、0.5ml離心管、帶濾芯的吸頭

3．負(fù)責(zé)人：        操作人：

4、程序：

4.1實(shí)驗(yàn)人員按需提出所購(gòu)耗材的品名、規(guī)格、數(shù)量，交科主任審核，報(bào)相關(guān)部門訂貨及購(gòu)買。

4.2 消耗品進(jìn)購(gòu)后經(jīng)質(zhì)檢合格方可入倉(cāng)，填寫(xiě)消耗品進(jìn)購(gòu)、質(zhì)檢記錄表。

4.3無(wú)菌處理前的消耗品貯存于試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)，定期領(lǐng)取消毒并作用量記錄，消毒過(guò)的消耗品送標(biāo)本制備區(qū)備用。

4.4消耗品在使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)質(zhì)量問(wèn)題（如畸形、離心管密閉性不好等），立即通知科主任，科主任報(bào)相關(guān)部門，辦理退、換貨手續(xù)。

5、質(zhì)檢

5.1  0.5ml、 1.5ml離心管

5.1.1   目測(cè):檢查離心管有無(wú)畸形、破損、不能閉蓋的情況。

5.1.2   實(shí)驗(yàn)檢測(cè)：

（1）目測(cè)合格后，隨機(jī)抽取50個(gè)離心管用于實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。

（2）離心管置于干式恒溫器中20分鐘后取出，如發(fā)現(xiàn)有爆開(kāi)情況發(fā)生，即認(rèn)為該批離心管不符合本實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)要求，作退貨處理。

（3）再將這50個(gè)離心管加半量生理鹽水后，10000rpm離心20分鐘，如發(fā)現(xiàn)有管蓋爆開(kāi)或漏液情況發(fā)生，即認(rèn)為該批離心管不符合本實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)要求作退貨處理。

（4）用6個(gè)離心管做平行對(duì)照實(shí)驗(yàn)，是否與預(yù)期結(jié)果一致。

（5）經(jīng)上述檢測(cè)合格后，即啟用該批耗材。

5.2  檢測(cè)帶濾芯的吸頭

5.2.1 目測(cè)：檢查吸頭有無(wú)畸形、破損，是否帶有濾芯。

5.2.2   實(shí)驗(yàn)檢測(cè)：

（1）目測(cè)合格后，隨機(jī)抽取50個(gè)吸頭用于實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。用適配加樣器配合吸取適量液體，檢查有無(wú)吸孔堵塞、漏氣現(xiàn)象發(fā)生，在排除移液器因素后，如有異常發(fā)現(xiàn)，即認(rèn)為該批吸頭不符合本實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)要求，作退貨處理。

（2）用10個(gè)濾芯吸頭做平行對(duì)照實(shí)驗(yàn)，是否與預(yù)期結(jié)果一致。

（3）經(jīng)上述檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)不合格情況后，即啟用該批耗材。

6.  本文涉及以下圖表

耗材進(jìn)購(gòu)記錄表                       

PCR室特殊耗材驗(yàn)收記錄表               

普通耗材驗(yàn)收記錄表                   

PCR室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作程序

1．目的：隨時(shí)了解并控制實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的精密度變化。

2．適用范圍：核酸擴(kuò)增熒光定量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。

3．負(fù)責(zé)人：       操作人：

4．程序：

4．1血清質(zhì)量控制品制備及操作

4．1．1質(zhì)控品制備：

收集本室檢測(cè)的臨床樣本，HBV DNA定量為10⁶copies/ml的樣本混勻，并分裝于0.5ml的離心管中，每支110µl，編號(hào)后（如Qb0201-n），-20℃保存。

4．1．2 操作：

每次檢測(cè)過(guò)程中將此分裝的室內(nèi)質(zhì)控品與樣本同時(shí)檢測(cè)，記錄此標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果；計(jì)算前10次檢測(cè)結(jié)果的平均值作為本批質(zhì)控品的靶值。

4．1．3如果使用商品化的質(zhì)控品，按4．１．２要求執(zhí)行。

4．2 室內(nèi)質(zhì)控圖的使用方法

4．2．1 描點(diǎn)

a） 圖中 線為靶線， ±2s為警告線， ±3s為失控線。

對(duì)于同一批號(hào)的質(zhì)控血清不論使用幾個(gè)月，其空?qǐng)D均不變化。只要將圖紙上方“起止日期”項(xiàng)填入每個(gè)月的實(shí)際起止日期即可。

b） 每天將該批號(hào)質(zhì)控血清按有關(guān)規(guī)定程序復(fù)融隨同病人的標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)。將日期、檢測(cè)結(jié)果和操作者如實(shí)記錄在圖下方的相應(yīng)位置，并按前面的方法畫(huà)出圖上的對(duì)應(yīng)點(diǎn)，用直線將該點(diǎn)與前一天的點(diǎn)連接。

c）月底計(jì)算當(dāng)月全部質(zhì)控血清檢測(cè)結(jié)果的 、s和CV，并進(jìn)行圖形分析和小結(jié)，將質(zhì)量控制圖存入質(zhì)控資料檔案。

4．2．2 圖形分析

a）如果在 ±3s線以外，則為失控，應(yīng)立即報(bào)告有關(guān)負(fù)責(zé)人，迅速查找原因。必要時(shí)復(fù)測(cè)標(biāo)本，然后方可發(fā)出報(bào)告，并將失控情況、查找過(guò)程及處理結(jié)果等詳細(xì)記錄。

b）如果在 ±2s線以外，或出現(xiàn)連續(xù)6點(diǎn)以上在一側(cè)等規(guī)律變化，均應(yīng)即使向有關(guān)負(fù)責(zé)人反映，并積極查找原因。但當(dāng)天的檢驗(yàn)結(jié)果一般可以發(fā)出。

4．2．3 通過(guò)觀察圖形的規(guī)律性變化進(jìn)行誤差分析，消除誤差來(lái)源

a）曲線漂移：提示有系統(tǒng)誤差，準(zhǔn)確度發(fā)生了一次性的向上或向下改變。這種變化往往是由于一個(gè)新的情況引起的。如更換不同批號(hào)試劑，啟用新批號(hào)的質(zhì)控血清、操作人員的變換等。在找原因時(shí)，應(yīng)重點(diǎn)注意“漂移”前后發(fā)生了那些變動(dòng)的因素。

b）趨勢(shì)性變化：向下或向上的趨勢(shì)性變化表明檢測(cè)的準(zhǔn)確度發(fā)生了漸漸地變化。這種變化往往是由于一個(gè)逐漸改變的因素造成的。如質(zhì)控血清的降解，試劑效價(jià)的降低等。

c）連續(xù)多點(diǎn)分布在靶值一側(cè)：目前，一般認(rèn)為質(zhì)控血清的檢測(cè)結(jié)果連續(xù)6天以上

出現(xiàn)在靶值同一側(cè)，則應(yīng)迅速查找原因，爭(zhēng)取盡快使之回復(fù)圍繞在靶值隨機(jī)分布的狀態(tài)。因?yàn)榘凑战y(tǒng)計(jì)學(xué)原理，由純隨機(jī)誤差造成的這種情況的可能性很小。連續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一側(cè)可能性小于1.5％。因此凡出現(xiàn)連續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一側(cè)者均有可能存在非隨機(jī)誤差因素。如結(jié)果與靶值偏離并不太大，不會(huì)給臨床使用帶來(lái)太大影響時(shí)，一般檢驗(yàn)報(bào)告可以照常填發(fā)。

d）其他規(guī)律變化：（周期性等）

4．2．4 通過(guò)圖形的資料對(duì)比進(jìn)行誤差分析，消除誤差來(lái)源

a）每個(gè)月的月底將該月的全部質(zhì)控血清檢測(cè)結(jié)果的 和s與該批測(cè)定的 和s進(jìn)行比較。如果 發(fā)生了變化，說(shuō)明準(zhǔn)確度發(fā)生了變化提示有非隨機(jī)誤差存在。如果當(dāng)月s不同則表明檢測(cè)的精密度發(fā)生了變化。

b）將使用同一批號(hào)質(zhì)控血清的CT值的 和s按月份列出。如果 逐月上升， 應(yīng)考慮保存不當(dāng)造成的試劑效價(jià)降低或質(zhì)控血清本身出現(xiàn)降解。如果各月份 基本一致而s逐月加大，則主要提示常規(guī)工作的精密度下降，應(yīng)重點(diǎn)從操作、管理上找原因。

c）在數(shù)年中，把每個(gè)月的CV和失控規(guī)律列成表，可用作檢測(cè)質(zhì)量的歷史性回顧及趨勢(shì)分析。

5. 本文涉及以下圖表：

PCR室內(nèi)質(zhì)控記錄表          

室內(nèi)質(zhì)控圖                

PCR室間質(zhì)量控制操作程序

1．目的：室間質(zhì)評(píng)（EQA）是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制體系中重要部分，是保證患者檢驗(yàn)結(jié)果和其報(bào)告的準(zhǔn)確性和可靠性，以及各實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果的可比性的重要手段。

2．適用范圍：衛(wèi)生部或省臨檢中心下發(fā)的PCR室間質(zhì)控血清檢測(cè)。

3．負(fù)責(zé)人：     操作人：

4．程序：

4.1質(zhì)控標(biāo)本的接收和驗(yàn)收：收到質(zhì)控血清后由相關(guān)人員登記、簽字，根據(jù)質(zhì)控標(biāo)本的有關(guān)說(shuō)明對(duì)血清的數(shù)量、批號(hào)、包裝進(jìn)行驗(yàn)收并將質(zhì)控標(biāo)本按要求置-20℃保存于標(biāo)本制備區(qū)。

4.2 質(zhì)控標(biāo)本的檢測(cè)按常規(guī)臨床標(biāo)本對(duì)待，若需要，檢測(cè)前先根據(jù)說(shuō)明對(duì)質(zhì)控物進(jìn)行復(fù)溶。

4.3室間質(zhì)評(píng)樣本必須按實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作進(jìn)行，由進(jìn)行常規(guī)工作的人員測(cè)試，工作人員必須使用實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢測(cè)方法和試劑，不得特殊對(duì)待。檢測(cè)結(jié)果須在截止日期前上報(bào)。

4.4實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)EQA樣本的次數(shù)必須與常規(guī)檢測(cè)病人樣本的次數(shù)一樣（即1次）。

4.5   EQA樣本的檢測(cè)在部或省臨檢中心規(guī)定的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行，檢測(cè)結(jié)果的上報(bào)也必須在截止  日期前，通過(guò)E-mail或掛號(hào)信寄出。

4.6室間質(zhì)評(píng)的檢測(cè)結(jié)果和反饋結(jié)果均記錄于室間質(zhì)評(píng)記錄表，根據(jù)反饋結(jié)果分析室間質(zhì)評(píng)的狀態(tài)，如有出控應(yīng)查找原因，并采取相應(yīng)的措施。

4.7 嚴(yán)禁與其它實(shí)驗(yàn)室交流室間質(zhì)評(píng)的檢測(cè)結(jié)果。

5. 本文涉及以下圖表：

室間質(zhì)評(píng)記錄表      

溫度校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序

1、目的： 保證實(shí)驗(yàn)時(shí)溫度的準(zhǔn)確

2、范圍： 基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室所有溫控的儀器

3．負(fù)責(zé)人：       操作人：

4、程序

4.1溫度計(jì)校準(zhǔn)程序：

4.1.1 由設(shè)備科人員送質(zhì)檢局對(duì)溫度計(jì)進(jìn)行校準(zhǔn)。每年進(jìn)行1次。

4.1.2經(jīng)校準(zhǔn)過(guò)的溫度計(jì)可作為微量恒溫器溫度校溫的參照。

4.2 水浴箱溫度校準(zhǔn)程序：

4.2.1 將水浴箱調(diào)至所設(shè)置的溫度，等水溫穩(wěn)定以后，進(jìn)行測(cè)量。

4.2.2 取出一只已經(jīng)技術(shù)監(jiān)督局校準(zhǔn)后的溫度計(jì)進(jìn)行測(cè)量。

4.2.3 計(jì)下讀數(shù)，重復(fù)在不同溫度下測(cè)量。

4.2.4 經(jīng)測(cè)量的溫度和水浴箱顯示溫度進(jìn)行比較，計(jì)算出誤差。

4.2.5 將水浴箱調(diào)至校準(zhǔn)后的溫度。

4.2.6 每次試驗(yàn)前都必須進(jìn)行此項(xiàng)工作。

4.3  冰箱溫度的校準(zhǔn)：（4℃冰箱和—20℃冰箱）

4.3.1 每次實(shí)驗(yàn)前都需對(duì)冰箱溫度進(jìn)行記錄，繪置冰箱溫度的質(zhì)控圖。

4.3.2 取一只已經(jīng)技術(shù)監(jiān)督局校準(zhǔn)后的溫度計(jì)對(duì)冰箱溫度進(jìn)行實(shí)際測(cè)量，并計(jì)下讀數(shù)。

4.3.3 反復(fù)多次測(cè)量，如超出規(guī)定范圍，將冰箱調(diào)至所需溫度。

4.4 擴(kuò)增儀溫度的校準(zhǔn)

4.4.1 將擴(kuò)增儀打開(kāi)并設(shè)至一溫度。

4.4.2 在擴(kuò)增儀的溫控孔入放一個(gè)反應(yīng)管，待溫度長(zhǎng)至所設(shè)溫度時(shí)，用一只已經(jīng)持術(shù)監(jiān)督局校準(zhǔn)過(guò)和溫度計(jì)插入反應(yīng)管中進(jìn)行測(cè)量溫度并記錄。

4.4.3 在不同溫度點(diǎn)進(jìn)行重復(fù)測(cè)量，取均值，并與擴(kuò)增儀的顯示溫度進(jìn)行比較。

4.4.4 由于儀器較精密，溫度相差太大則需請(qǐng)廠家前來(lái)校準(zhǔn)并調(diào)試。

4.4.5 經(jīng)調(diào)試后貼上綠色標(biāo)簽，標(biāo)明時(shí)間儀器的性能狀態(tài)。

5.      本文涉及以下圖表

PCR實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫濕度記錄表         

冰箱溫度質(zhì)控圖                     

PE 5700型核酸擴(kuò)增熒光儀操作維護(hù)程序

1．目的：使PE 5700型核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)儀能夠正確和正常的使用，保證擴(kuò)增及結(jié)果分析的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化。

2．適用范圍：PE 5700型核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)儀。

3．負(fù)責(zé)人：        操作人：

4.  性能參數(shù):見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。

5. 操作程序：

5．1 擴(kuò)增反應(yīng)前須先在PE5700 SDS 軟件的設(shè)置面板上按照事先排好的標(biāo)本位置進(jìn)行設(shè)置。每次實(shí)驗(yàn)除了待檢標(biāo)本，還要包括一個(gè)陰性對(duì)照、一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照、一個(gè)陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品、一組陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品（4個(gè)梯度10⁴、10⁵、10⁶、10⁸）。

5．2 依次打開(kāi)電腦顯示器和電腦主機(jī)的電源開(kāi)關(guān)，進(jìn)入Windows NT界面。

5．3 接著打開(kāi)光源檢測(cè)器和PCR儀電源開(kāi)關(guān)，預(yù)熱5分鐘。 

5．4 點(diǎn)擊PE 5700 SDS 圖標(biāo)，打開(kāi)軟件。

5．5 在New plate Application 窗口分別選定5700/SYBR Green， 然后單擊OK，打開(kāi)一空白設(shè)置面板。

5．6 在Setup 版面設(shè)定樣品種類與名稱，數(shù)量。

5．6．1 在Type欄中選擇類別：STND－標(biāo)準(zhǔn)梯度，UNKN－未知樣品，

                             NTC－陰性對(duì)照，Not in use－未使用

5．6．2 再在Name欄中依次輸入樣品名稱。

5．6．3 在框定所選標(biāo)準(zhǔn)梯度孔數(shù)后，需在工具欄中單擊P窗口，選定PR1 primer SYBR后，關(guān)閉窗口，可見(jiàn)所選孔左下角有一長(zhǎng)方形陰影。

5．6．4 在框定所選孔數(shù)后，在工具欄中單擊Q窗口，即可在此窗口輸入定值標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)量。

5．7 點(diǎn)擊Instrument 即可在此窗口設(shè)定循環(huán)參數(shù)。

5．8 選定任務(wù)欄File中的Save項(xiàng)，彈出對(duì)話框。在對(duì)話框中的File Name項(xiàng)下輸入一組數(shù)字和（或）字母組成的文件名，選Save。

5．9 檢查設(shè)置正確與否，運(yùn)行程序

5．9．1 在設(shè)置完程序文件的Instrument窗口，點(diǎn)RUN鍵，即可運(yùn)行。

5．9．2 反應(yīng)結(jié)束后，選任務(wù)欄File中的Save項(xiàng)，保存實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5．10 關(guān)閉PE 5700 序列檢測(cè)器開(kāi)關(guān)，再關(guān)擴(kuò)增儀開(kāi)關(guān)。

5．11 結(jié)果分析標(biāo)準(zhǔn)程序：

對(duì)于5700結(jié)果曲線的分析，應(yīng)按以下步驟進(jìn)行：全部曲線——陰性對(duì)照——陽(yáng)性對(duì)照——陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品——陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品——逐個(gè)分析（標(biāo)出陽(yáng)性標(biāo)本和可疑標(biāo)本）——調(diào)整參數(shù)，獲得較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，顯示定量結(jié)果——登記，發(fā)報(bào)告。

5．11．1 整體曲線的觀察,將所有曲線選中進(jìn)行整體觀察.

a)觀察是否存在污染情況（包括標(biāo)本污染和試劑污染），特別應(yīng)注意大量曲線在同一Ct值出現(xiàn)上漲的情況。

b)觀察是否有光路傳導(dǎo)阻滯或電壓波動(dòng)等機(jī)器原因形成的異常曲線。

5．11．2 陰性對(duì)照的分析

陰性對(duì)照：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知陰性標(biāo)本。

作用：用以監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室和前處理過(guò)程中是否存在污染。

5．11．3 陽(yáng)性對(duì)照的分析

陽(yáng)性對(duì)照：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知陽(yáng)性標(biāo)本。

作用：用以監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)?zāi)芊裾�常檢出陽(yáng)性標(biāo)本，避免假陰性的出現(xiàn)。

5．11．4 陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品的分析

陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知或未知濃度的陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控血清。

作用：用以監(jiān)控日常實(shí)驗(yàn)的精密度。

5．11．5 陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品的分析

a)各梯度曲線的分布是否均勻，若各梯度曲線均未分開(kāi)，則表明陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品稀釋可能存在問(wèn)題，提示實(shí)驗(yàn)中存在較大人為誤差。

b)觀察各曲線的Ct值是否在平日的正常位置：

情況1：若出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而各曲線Ct 值均后移，則判斷是否為試劑擴(kuò)增效率下降（如試劑過(guò)期或保存條件不合格）。

情況2：出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而高拷貝曲線Ct值均正常，則提示可能存在低拷貝陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品的降解情況。

c) 每日必做10²標(biāo)準(zhǔn)品，用作以下三方面監(jiān)控：

一 是否存在操作誤差，如加樣量過(guò)少等原因?qū)е?0²標(biāo)準(zhǔn)品未能檢出；

二 是否存在稀釋后的梯度放置過(guò)久，低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品降解的情況；

三 若高拷貝標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)Ct值后移，且能排除情況A、B，則判斷是否為試劑靈敏度下降。

5．11．6 單個(gè)曲線的判斷

逐個(gè)分析每條曲線，判斷曲線的陰陽(yáng)性或?qū)倏梢汕�線。（可疑標(biāo)本是指曲線在27個(gè)Ct值后出現(xiàn)上漲且平臺(tái)趨勢(shì)不明顯或上漲幅度比較低的標(biāo)本。可疑標(biāo)本要第二天重做，兩次結(jié)果一致則報(bào)陽(yáng)性，否則結(jié)果報(bào)陰性。）曲線觀察內(nèi)容：在基線選擇2～8時(shí)觀察△Rn值大小（是否有三期特征）。在基線選擇0～0時(shí)觀察Rn值曲線形狀。

5．11．7 得出定量結(jié)果

調(diào)節(jié)基線和閾值以得到一較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。電腦據(jù)此曲線給出陽(yáng)性結(jié)果值。此時(shí)應(yīng)排除某些陰性標(biāo)本因熒光曲線假性上揚(yáng)而得出的假陽(yáng)性結(jié)果和某些弱陽(yáng)性標(biāo)本因終末熒光值過(guò)低而顯示的假陰性。

5．11．8發(fā)放報(bào)告

及時(shí)登記檢測(cè)結(jié)果記錄，發(fā)放臨床報(bào)告。

5.12.維護(hù)和校準(zhǔn)程序：

5.12．1 微軟Windows NT工作站的維護(hù)

硬盤(pán)驅(qū)動(dòng)器每月29日左右運(yùn)行一次碎片清除程序，使用Norton Utilities或類似軟件。具體步驟：

a）放入Norton Utilities光盤(pán)。

b）從My Computer打開(kāi)Norton Utilities軟件光盤(pán)。

c）啟動(dòng)清理碎片/優(yōu)化程序。

d）運(yùn)行完成后，檢查以確信無(wú)嚴(yán)重錯(cuò)誤記錄，退出Norton Utilities。

e）取出Norton Utilities光盤(pán)，重新啟動(dòng)計(jì)算機(jī)。

5.12．2  PCR儀的維護(hù)

5.12．2．1 樣品槽的清潔

樣品槽每月進(jìn)行一次清潔，如出現(xiàn)樣品槽污染情況則隨時(shí)清潔。

操作方法：

a）運(yùn)行25℃HOLD程序使樣品槽溫度達(dá)到室溫。關(guān)閉儀器，等待10分鐘。

b）從樣品槽移去樣品架。

c）在樣品槽中加入少量濃度≥95%乙醇，用尼龍棉簽或塑料桿擦洗反應(yīng)孔。

d）用干棉簽吸干乙醇。

e）在PE 5700光源檢測(cè)器未蓋住樣品槽時(shí)，打開(kāi)PCR儀，并升溫到50℃運(yùn)行10分鐘，以蒸發(fā)掉多余的乙醇。

5.12．2．2  熱蓋的清潔

熱蓋每月進(jìn)行一次清潔，如有需要隨時(shí)進(jìn)行。

a）運(yùn)行25℃HOLD程序使樣品槽溫度達(dá)到室溫。關(guān)閉儀器，等待10分鐘。

b）逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)PE 5700光源檢測(cè)器頂部旋鈕。向后推PE 5700光源檢測(cè)器至滑軌距離的大約1/3處。

c）PE 5700光源檢測(cè)器滑軌上有缺口。從這些缺口垂直抬起PE 5700光源檢測(cè)器，小心側(cè)放于儀器頂蓋上。不要從儀器取走熱蓋。

d）用經(jīng)過(guò)濃度≥95%乙醇濕潤(rùn)的鏡頭紙或脫脂棉球清潔加熱蓋，待干。

e）將PE 5700光源檢測(cè)器重新安裝回滑軌。

5.12．2．3  PE 5700光路系統(tǒng)的維護(hù)

5.12．2．3．1  調(diào)準(zhǔn)ROI參照條

調(diào)準(zhǔn)ROI參照條在儀器更換鹵素?zé)簟�儀器定期校準(zhǔn)或儀器維修后進(jìn)行。不得由一般實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行該項(xiàng)操作。

a）PCR儀樣品槽中放入熒光檢測(cè)板。

b）將PE 5700光源檢測(cè)器向前拖動(dòng)蓋住樣品槽，并旋緊。

c）從Start菜單選擇運(yùn)行PE 5700 SDS管理軟件。

d）積分時(shí)間從512ms開(kāi)始，用位置調(diào)整點(diǎn)，調(diào)節(jié)ROI的高度與右邊線。

e）逐漸增加積分時(shí)間，直到可以看到至少四個(gè)塊（約4096ms）。

f）調(diào)整最左側(cè)位置調(diào)整點(diǎn)。

g）減少積分時(shí)間到1024ms，調(diào)整上方與底部的位置調(diào)整點(diǎn)。

h）減少積分時(shí)間以便最右側(cè)塊可見(jiàn)但未飽和（約512ms），調(diào)節(jié)最右側(cè)位置調(diào)整點(diǎn)。如有需要用右上角拖動(dòng)點(diǎn)調(diào)整圖像的傾斜度（以左上角為中心旋轉(zhuǎn)）。

i）調(diào)節(jié)后的參照條寬度必須在ROI參照塊間有小空隙。

5.12．2．3．2  校正ROI光路

ROI光路校正每月進(jìn)行一次，以便確信結(jié)果仍然是優(yōu)化的。

a）在PCR儀樣品槽中放入熒光檢測(cè)板。

b）將PE 5700光源檢測(cè)器向前拖動(dòng)蓋住樣品槽，并旋緊。

c）從Start菜單選擇運(yùn)行PE 5700 SDS管理軟件。

d）點(diǎn)選Show ROI復(fù)選框。每個(gè)樣品孔周圍出現(xiàn)一藍(lán)色橢圓圈。

e）點(diǎn)選Show Saturation復(fù)選框。

f）設(shè)定積分時(shí)間為1024ms；打開(kāi)鹵素?zé)艉凸忾l。

g）點(diǎn)擊LIVE按鈕獲取圖像，然后在任何地方左擊停止。獲取中等程度未飽和圖像（無(wú)紅色圖像）。

h）從Edit菜單中選擇Calibrate ROIs每個(gè)孔都會(huì)選取合適的ROI，確定96孔都被藍(lán)色橢圓圈正確界定。

i）圖像太亮太暗都會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤信息，相應(yīng)增加或減少積分時(shí)間，并重復(fù)上述第8步直到無(wú)錯(cuò)誤信息出現(xiàn)。

j）檢查孔R(shí)OI位置，所有孔信息都應(yīng)包含在96個(gè)ROI橢圓圈中。如果沒(méi)有，重復(fù)8和9步。

5.12．2．3．3  檢查PCR儀樣品槽的熒光污染

檢查PCR儀樣品槽的熒光污染每月進(jìn)行一次，如有需要隨時(shí)進(jìn)行。

a）開(kāi)啟PE 5700型核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)儀電源。

b）從Start菜單選擇運(yùn)行PE 5700 SDS管理軟件。

c）從樣品槽中移去反應(yīng)板。

d）將PE 5700光源檢測(cè)器向前拖動(dòng)蓋住樣品槽，并旋緊。

e）設(shè)定積分時(shí)間為256ms；打開(kāi)鹵素?zé)艉凸忾l。

f）點(diǎn)擊LIVE按鈕獲取圖像，然后在任何地方點(diǎn)擊停止。

g）觀察96孔中背景熒光。如孔有顯著熒光則表示該孔存在熒光污染。

h）按照樣品槽的清潔程序清洗樣品槽。

5.12．2．3．4  更換鹵素?zé)?/P>

儀器使用大約2000小時(shí)后應(yīng)更換鹵素?zé)?但具體要視鹵素?zé)魧?shí)際情況而定。

a）關(guān)閉PE 5700型核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)儀，冷卻15分鐘。

b）移去PE 5700光源檢測(cè)器頂蓋。

c）移去鹵素?zé)繇斏w。

d）把舊燈泡從插座中滑出，更換新鹵素?zé)簟４_信燈正確安裝在位置上。滑動(dòng)燈泡時(shí)要輕輕抬起燈以避開(kāi)裝配螺絲釘。

e）重新裝上燈頂蓋和PE 5700光源檢測(cè)器頂蓋。

f）開(kāi)啟PE 5700型核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)儀電源，運(yùn)行PE 5700 SDS管理軟件。

g）通過(guò)軟件控制鹵素?zé)糸_(kāi)關(guān)，確認(rèn)燈隨開(kāi)關(guān)開(kāi)閉。

h）開(kāi)啟光閘，確認(rèn)光閘可打開(kāi)。

i）設(shè)定積分時(shí)間為1024ms，點(diǎn)擊LIVE。保證可以采集一幅數(shù)據(jù)圖像。

j）若新鹵素?zé)舨还ぷ鳎琍E 5700電源保險(xiǎn)管可能有問(wèn)題。

5.12．3 校準(zhǔn)

PE 5700型核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)儀為復(fù)雜精密儀器，其校準(zhǔn)工作需由專業(yè)工程師進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)與儀器廠家達(dá)成協(xié)議，定期（一般每年一次）校準(zhǔn)儀器。

平時(shí)通過(guò)對(duì)室內(nèi)質(zhì)控圖的分析，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)系統(tǒng)誤差后，又經(jīng)過(guò)分析排除了試劑和人員誤差，應(yīng)懷疑是否儀器出現(xiàn)了檢測(cè)偏差從而需要校準(zhǔn)。

實(shí)驗(yàn)室人員根據(jù)上述“光路系統(tǒng)的維護(hù)”部分的內(nèi)容調(diào)節(jié)光路，可初步確定儀器是否光路原因引起的檢測(cè)偏差，通過(guò)光路調(diào)節(jié)解決問(wèn)題。若問(wèn)題不出在光路系統(tǒng)，則應(yīng)聯(lián)系儀器廠家派技術(shù)人員來(lái)進(jìn)行校準(zhǔn)。

注意事項(xiàng)：

a）儀器應(yīng)放置在水平堅(jiān)固的平臺(tái)上，外界電源系統(tǒng)電壓要匹配，并要求有良好的接地線。

b）環(huán)境溫度保持在23℃左右，濕度保持在60％左右。

c）儀器應(yīng)每月底清潔維護(hù)。

d）儀器使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守上述使用步驟。

6. 期間核查

(1)PE-5700基因擴(kuò)增儀的定標(biāo)不需要特別的周期間隔，本實(shí)驗(yàn)室PE-5700基因擴(kuò)增儀執(zhí)行衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的指定校準(zhǔn)。

(2) 校準(zhǔn)物均為與ICSH之標(biāo)準(zhǔn)相符合的校準(zhǔn)物，測(cè)定值偏差均不超過(guò)其規(guī)定值。

7 . 相關(guān)記錄

儀器使用登記表

儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表

儀器設(shè)備檢定周期表

儀器設(shè)備維修申請(qǐng)表

儀器報(bào)廢（停用）單

儀器設(shè)備使用授權(quán)表

儀器設(shè)備檔案卡

儀器設(shè)備領(lǐng)（借）用登記表

儀 器 設(shè) 備 總 表

干式恒溫器操作維護(hù)規(guī)程

1．目的：正確使用、維護(hù)和校準(zhǔn)干式恒溫器。

2．適用范圍：干式恒溫器。

3．負(fù)責(zé)人：       操作人：

4. 技術(shù)參數(shù):見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。

5．程序：

5．1干式恒溫器應(yīng)置于堅(jiān)固的水平臺(tái)上，電源電壓須匹配。

5．2 打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，設(shè)定溫度時(shí)間至所需溫度。

5．3 設(shè)定恒溫時(shí)間至所需時(shí)間。

5．4 當(dāng)測(cè)定溫度達(dá)到設(shè)定溫度時(shí)，加熱中斷、指示燈熄滅，測(cè)定溫度小于設(shè)定溫度時(shí)，指示燈亮，開(kāi)始加熱，如此反復(fù)，溫度可保持穩(wěn)定。

5．5 每年校正溫度一次。

5．6 干式恒溫器波動(dòng)范圍應(yīng)控制在：溫度 +/–1℃以內(nèi)。

5．7溫度誤差校準(zhǔn)

5．7．1本儀器出廠前溫度己校準(zhǔn)。但由于某些原因造成實(shí)際溫度與顯示溫度之間存在偏差，可按以下方法修正溫度誤差；

注意！為了保證溫度的準(zhǔn)確性，本儀器采用兩點(diǎn)溫度校準(zhǔn)法，即40℃與100℃兩點(diǎn)溫度同步線性校準(zhǔn)法。經(jīng)兩點(diǎn)溫度線性校準(zhǔn)后，系統(tǒng)保證其它溫度點(diǎn)的溫度準(zhǔn)確度≤±0.5℃。校準(zhǔn)溫度時(shí)環(huán)境溫度和模塊的溫度必須低于30℃。

5．7．2具體操作方法如下：

a)儀器開(kāi)機(jī)后，進(jìn)入等待界面，此時(shí)觀察溫度顯示窗溫度，確認(rèn)其溫度值應(yīng)小于35℃。若溫度高于35℃，等溫度降至35℃后，按以下方法操作。

b)將石臘油注入模塊中心位置的一個(gè)錐形孔內(nèi)，并于錐形孔中放入溫度計(jì)（要求溫度計(jì)精度為0.1℃，溫度計(jì)感溫包必須完全浸入于錐形孔內(nèi)），模塊上部用隔熱材料于環(huán)境隔離。見(jiàn)下圖a.

c)  同時(shí)按下▲和  鍵，進(jìn)入溫度校準(zhǔn)界面，

此時(shí)，時(shí)間顯示窗顯示為：“ADLF”表示己進(jìn)入溫度校準(zhǔn)程序；溫度顯示窗顯示為即時(shí)溫度，并自動(dòng)開(kāi)始升溫至40.0℃

當(dāng)溫度升溫至40.0℃恒溫后,小數(shù)位開(kāi)始閃爍,等待40℃的溫度校準(zhǔn)值。要求理溫20分鐘后，讀取溫度計(jì)的實(shí)測(cè)溫度。

注意！為保證溫度校準(zhǔn)精度，建議用戶于恒溫20分鐘后讀取實(shí)測(cè)溫度！

 若溫度計(jì)讀取的數(shù)值為39.6℃,則按“TEMP”和▲或  鍵于溫度顯示窗內(nèi)輸入39.6，按“R/S”鍵確認(rèn)輸入值。

d)接著儀器自動(dòng)升溫至100℃，于100℃恒溫后等待輸入溫度校準(zhǔn)值。同樣要求恒溫20分鐘后，讀取溫度計(jì)的實(shí)測(cè)溫度。

注意！為保證溫度校準(zhǔn)精度，建議用戶于恒溫20分鐘后讀取實(shí)測(cè)溫度！

若溫度計(jì)讀取的數(shù)值為101.5℃，則按“TEMP”和▲或  鍵于溫度顯示窗內(nèi)輸入101.5，按“R/S”鍵確認(rèn)輸入值。

e)這樣兩點(diǎn)校溫己完成，同時(shí)按下▲和  鍵，退出溫度校準(zhǔn)界面，返回至等待界面。

注意！兩點(diǎn)溫度校準(zhǔn)過(guò)程中，同時(shí)按下▲和  鍵，則退出校溫程序，己修正的溫度值無(wú)效！

5．8 干式恒溫器內(nèi)外應(yīng)保持清潔，外殼忌用腐蝕性溶液擦拭。

5．9 儀器長(zhǎng)期不用時(shí)，需防潮防塵保存。

6. 儀器維護(hù)

(1) 本儀器應(yīng)定期用干凈軟布沾少量無(wú)水酒精清冼模塊上的錐孔,以保證試管與錐孔壁接觸充分,導(dǎo)熱良好,避免污染。

(2) 本儀器表面如有污染,可用軟布沾清潔膏清冼。

(3) 該儀器在日常使用中請(qǐng)注意符合“5.”要求。

(4) 嚴(yán)格按照儀器的開(kāi)關(guān)機(jī)程序關(guān)機(jī)。

6. 期間核查

(1) 干式恒溫器的定標(biāo)不需要特別的周期間隔。

(2) 每年必須校正溫度一次。

7 相關(guān)記錄：

儀器使用登記表

儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表

儀器設(shè)備檢定周期表

儀器設(shè)備維修申請(qǐng)表

儀器報(bào)廢（停用）單

儀器設(shè)備使用授權(quán)表

儀器設(shè)備檔案卡

儀器設(shè)備領(lǐng)（借）用登記表

儀 器 設(shè) 備 總 表

離心機(jī)操作維護(hù)程序

1．目的：保證離心機(jī)的正常使用。

2．適用范圍：適用于本室使用的普通離心機(jī)。

3．負(fù)責(zé)人：     操作人：

4. 性能參數(shù):見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。

5．程序：

5．1 離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅(jiān)固的地板或平臺(tái)上，并力求使儀器處于水平位置以免離心時(shí)造成儀器振蕩。

5．2 打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，將預(yù)先平衡好的樣品對(duì)稱放置于轉(zhuǎn)頭的樣品架上，關(guān)閉機(jī)蓋。

5．3 旋動(dòng)定時(shí)旋鈕設(shè)定離心時(shí)間，緩慢旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)旋鈕使儀器轉(zhuǎn)速達(dá)到預(yù)定要求。

5．4 離心完畢后，將轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)回零位，關(guān)閉電源開(kāi)關(guān)。

5．5 待離心機(jī)完全停止轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)打開(kāi)機(jī)蓋，取出離心樣品，再次關(guān)閉機(jī)蓋結(jié)束離心。

5．6 離心室的清潔：為了避免樣本等殘留物的污染，應(yīng)經(jīng)常對(duì)離心機(jī)外殼和離心室進(jìn)行清潔處理。對(duì)離心室清潔，應(yīng)先打開(kāi)離心機(jī)蓋，撥掉電源線，用專用設(shè)備將離心機(jī)轉(zhuǎn)子旋下，再用中性去污劑（70%的異丙醇/水混合物或乙醇去污染）清潔離心室；離心室內(nèi)的橡膠密封圈經(jīng)去污劑處理后，用水沖洗，再用甘油潤(rùn)滑。

5．7 轉(zhuǎn)子的清潔：轉(zhuǎn)子會(huì)被樣本殘留物污染，也可能會(huì)被某些化學(xué)試劑腐蝕，因此應(yīng)對(duì)轉(zhuǎn)子每月進(jìn)行清潔維護(hù)。每月用中性的清潔劑清潔轉(zhuǎn)子一次，并在儀器維護(hù)記錄本上作好記錄，以延長(zhǎng)轉(zhuǎn)子的壽命。

6. 儀器維護(hù)

(1) 為確保安全和離心效果,儀器必須放置在堅(jiān)固水平的臺(tái)面上,塑料蓋門上不得放置任何物品,樣品必須對(duì)稱放置,并在開(kāi)機(jī)前確保已擰緊螺母。

(2) 應(yīng)經(jīng)常檢查轉(zhuǎn)頭及試驗(yàn)用的離心管是否有裂紋,老化等現(xiàn)象,如有須及時(shí)更換.

(3) 試驗(yàn)完畢后,需將儀器擦拭干凈,以防腐蝕.

(4) 如樣品比重超過(guò)1.2g/cm³,最高轉(zhuǎn)速n按下式計(jì)算:n=nmax*√--1.2/樣呂比重.

(5) 當(dāng)電機(jī)碳刷長(zhǎng)度小于6mm時(shí),必須及時(shí)更換.

(6) 在離心機(jī)未停穩(wěn)時(shí)不得開(kāi)蓋.

(7) 儀器必須有可靠接地.

(8) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,請(qǐng)關(guān)閉后面的電源開(kāi)關(guān),撥掉電源插頭時(shí),請(qǐng)不要忘了打開(kāi)后面的電源開(kāi)關(guān).

(9) 該儀器在日常使用中請(qǐng)注意符合“5.6,5.7”要求。

      (10) 嚴(yán)格按照儀器的開(kāi)關(guān)機(jī)程序關(guān)機(jī)。

7. 期間核查

(1)本儀器不需要特別的周期間隔。

(2) 校準(zhǔn)物均為與ICSH之標(biāo)準(zhǔn)相符合的校準(zhǔn)物，測(cè)定值偏差均不超過(guò)其規(guī)定值。

8. 相關(guān)記錄

儀器使用登記表

儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表

儀器設(shè)備檢定周期表

儀器設(shè)備維修申請(qǐng)表

儀器報(bào)廢（停用）單

儀器設(shè)備使用授權(quán)表

儀器設(shè)備檔案卡

儀器設(shè)備領(lǐng)（借）用登記表

儀器設(shè)備總表

冰箱操作維護(hù)規(guī)程

1．目的：對(duì)冰箱進(jìn)行適當(dāng)?shù)木S護(hù)，以確保冰箱的正常使用。

2．適用范圍：本實(shí)驗(yàn)室使用的各種品牌、型號(hào)的冰箱。

3．負(fù)責(zé)人：      操作人：

4.  性能參數(shù):見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。

5．程序：

4．1  開(kāi)、關(guān)機(jī)：冰箱按說(shuō)明書(shū)要求放好后，插上電源線，冷藏室溫度開(kāi)關(guān)置于4℃，冷凍室溫度開(kāi)關(guān)置于 -20℃，2小時(shí)后用溫度計(jì)確認(rèn)。系統(tǒng)進(jìn)入正常運(yùn)行狀態(tài)后即可使用。

4．2 外冰箱應(yīng)放置于水平地面并留有一定的散熱空間。外接電源電壓必須匹配，并要求有良好的接地線。

4．3 冰箱內(nèi)禁止存放與本實(shí)驗(yàn)室無(wú)關(guān)的物品。

4．4 放入冰箱內(nèi)的所有試劑、樣品、質(zhì)控品等必須密封保存。

4．5 保持冰箱出水口通暢；非自動(dòng)除霜冰箱應(yīng)在每月底除霜；月底清潔冰箱，清潔時(shí)切斷電源，用軟布蘸水擦拭冰箱內(nèi)外，必要時(shí)可用中性洗滌劑。

4．6 每日觀察冰箱內(nèi)溫度并記錄于冰箱的質(zhì)控圖上。

4．7 若溫度超出規(guī)定范圍，調(diào)節(jié)溫控使其回到正常范圍，并進(jìn)行記錄。    

4．8 若溫控調(diào)節(jié)無(wú)效，報(bào)請(qǐng)?jiān)O(shè)備科維修，修理后須驗(yàn)收合格并簽字后方能正常使用。

6. 儀器維護(hù)

(1) 使用注意。該儀器在日常使用中請(qǐng)注意符合“4. 注意事項(xiàng)”要求

(2) 廢液瓶滿要及時(shí)倒掉廢液，切勿強(qiáng)行扯動(dòng)紅黃兩根管來(lái)打開(kāi)瓶蓋，檢查廢液瓶是否漏氣，防止低真空出現(xiàn)。

(3) 當(dāng)出現(xiàn)堵孔時(shí)，按自動(dòng)沖洗鍵沖洗管道。

 (4) 嚴(yán)格按照儀器的關(guān)機(jī)程序關(guān)機(jī)。

7. 期間核查

(1冰箱不需要特別的周期間隔。

(2) 校準(zhǔn)物均為與ICSH之標(biāo)準(zhǔn)相符合的校準(zhǔn)物，測(cè)定值偏差均不超過(guò)其規(guī)定值。

8 . 相關(guān)記錄

儀器使用登記表

儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表

儀器設(shè)備檢定周期表

儀器設(shè)備維修申請(qǐng)表

儀器報(bào)廢（停用）單

儀器設(shè)備使用授權(quán)表

儀器設(shè)備檔案卡

儀器設(shè)備領(lǐng)（借）用登記表

儀 器 設(shè) 備 總 表

生物安全柜操作維護(hù)規(guī)程

1．目的：正確使用生物安全柜。

2．適用范圍：本SOP適用于本實(shí)驗(yàn)室使用的生物安全柜。

3．負(fù)責(zé)人：      操作人：

4.  性能參數(shù):見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。

5．程序：

5．1 新安裝或長(zhǎng)期未使用的生物安全柜，使用前必須用超凈真空吸塵器或不產(chǎn)生纖維的物品認(rèn)真進(jìn)行清潔工作。5．2 接通電源，使用前應(yīng)提前15～30分鐘同時(shí)開(kāi)啟紫外燈和風(fēng)機(jī)組工作。

5．3 當(dāng)需要調(diào)節(jié)風(fēng)機(jī)風(fēng)速時(shí)，用生物安全柜操作面板上的風(fēng)速調(diào)節(jié)鈕進(jìn)行調(diào)節(jié)。風(fēng)機(jī)、照明均由指示燈指示其工作狀態(tài)。

5．4 工作臺(tái)面上禁止存放不必要的物品，以保持工作區(qū)的潔凈氣流不受干擾。

5．5 禁止在工作臺(tái)面上記錄書(shū)寫(xiě)，工作時(shí)應(yīng)盡量避免作明顯擾動(dòng)氣流的動(dòng)作；禁止在預(yù)過(guò)濾進(jìn)風(fēng)口部位放置物品，以免擋住進(jìn)風(fēng)口造成進(jìn)風(fēng)量減少，降低凈化能力。

5．6 使用結(jié)束后，用消毒液清理工作臺(tái)面后打開(kāi)紫外燈，15～30分鐘后關(guān)閉紫外燈，關(guān)閉生物安全柜電源。每次使用生物安全柜后，均需對(duì)其進(jìn)行清潔。

5．7根據(jù)環(huán)境潔凈程度，定期將預(yù)過(guò)濾器中的濾料拆下清洗，一般間隔時(shí)間為3～6個(gè)月。

5．8定期（一般每半年1次）計(jì)測(cè)工作區(qū)風(fēng)速，如發(fā)現(xiàn)不符合技術(shù)參數(shù)要求，則可調(diào)大風(fēng)機(jī)供電電壓。當(dāng)風(fēng)機(jī)組電壓調(diào)到最大時(shí)，工作區(qū)風(fēng)速仍達(dá)不到0.3m/s，則必須更換高效空氣過(guò)濾器（由廠家或院儀器維修人員進(jìn)行）。4．9有相應(yīng)的維護(hù)記錄，長(zhǎng)期不使用的生物安全柜撥下電源插頭。

6. 儀器維護(hù)

(1) 使用注意。該儀器在日常使用中請(qǐng)注意符合“4. 注意事項(xiàng)”要求

(2) 廢液瓶滿要及時(shí)倒掉廢液，切勿強(qiáng)行扯動(dòng)紅黃兩根管來(lái)打開(kāi)瓶蓋，檢查廢液瓶是否漏氣，防止低真空出現(xiàn)。

(3) 當(dāng)出現(xiàn)堵孔時(shí)，按自動(dòng)沖洗鍵沖洗管道。

 (4) 嚴(yán)格按照儀器的關(guān)機(jī)程序關(guān)機(jī)。

7. 期間核查

(1)PE-5700基因擴(kuò)增儀的定標(biāo)不需要特別的周期間隔，本實(shí)驗(yàn)室PE-5700基因擴(kuò)增儀執(zhí)行衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的指定校準(zhǔn)。

(2) 校準(zhǔn)物均為與ICSH之標(biāo)準(zhǔn)相符合的校準(zhǔn)物，測(cè)定值偏差均不超過(guò)其規(guī)定值。

8. 相關(guān)記錄

儀器使用登記表

儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表

儀器設(shè)備檢定周期表

儀器設(shè)備維修申請(qǐng)表

儀器報(bào)廢（停用）單

儀器設(shè)備使用授權(quán)表

儀器設(shè)備檔案卡

儀器設(shè)備領(lǐng)（借）用登記表

儀 器 設(shè) 備 總 表

移液器操作維護(hù)規(guī)程

1．目的：確保移液的精確性，正確使用移液器。

2．適用范圍：本實(shí)驗(yàn)室使用的可調(diào)式移液器。

3．負(fù)責(zé)人：        操作人：

4．程序：

4．1移液器的使用

4．1．1轉(zhuǎn)動(dòng)旋鈕設(shè)定移液量，設(shè)定的移液量不可超出該移液器規(guī)定的范圍。

4．1．2 裝上配套的Tip。

4．1．3 前進(jìn)移液法

a） 將按鈕壓至第一停點(diǎn)位置；

b ）將移液管管嘴浸入液面下2~3mm深處，然后慢慢松開(kāi)按鈕吸入液體。待移入管嘴吸滿液體后，將管嘴撤出液面，擦掉管嘴外側(cè)的所有液滴。

c） 輕輕壓下操作按鈕至第一停點(diǎn)位置，放出液體。約1秒鐘后，繼續(xù)將操作按鈕向下壓至第二停點(diǎn)位置。待管嘴液體放干凈后，將管嘴貼在容器瓶壁上防止形成液滴滴入瓶中，撤出管嘴。

d）松開(kāi)按鈕使之回到起點(diǎn)位置。需要時(shí)，可更換管嘴繼續(xù)移液操作。

4．1．4 倒退移液法：適用于高粘度液體及/或易起泡沫液體的移液。

a） 將操作按鈕向下壓至第二停點(diǎn)位置。

b）將移液管管嘴浸入試劑瓶液面下2~3mm深處，然后慢慢松開(kāi)鈕吸入液體。待移入管嘴吸滿液體后，將管嘴撤出液面，擦掉管嘴外側(cè)的所有液滴。

c ）輕輕壓下操作按鈕至第一停點(diǎn)位置，放出液體。

d）遺留在管嘴時(shí)的液體或者隨管嘴一起扔掉，或者放回原來(lái)的容器中。

4．1．5 重復(fù)操作法：重復(fù)操作移液法可以快速、簡(jiǎn)便地重復(fù)轉(zhuǎn)移同體積的同種液體。

a）將操作按鈕向下壓至第二停點(diǎn)位置。

b）將移液管管嘴浸入液面下2~3mm深處，然后慢慢松開(kāi)按鈕吸入液體。待移入管嘴吸滿液體后，將管嘴貼在容器瓶壁上防止形成液滴滴入瓶中。

c）輕輕壓下操作按鈕至第一停點(diǎn)位置，放出液體。待放完所需體積液體后，把按鈕停在第一停點(diǎn)位置，不包括在移液量之內(nèi)的少量液體仍留在管嘴內(nèi)，管嘴外的液滴則需包括在移液量之內(nèi)。

d ）將管嘴浸入試劑液面下不遠(yuǎn)處，然后慢慢松開(kāi)按鈕使管嘴重新吸入液體。

e）重復(fù)步序c）和d ）繼續(xù)移液操作，就可重復(fù)轉(zhuǎn)移相同體積液體。

4．2  移液器的維護(hù)

每天對(duì)使用過(guò)的移液器用75%酒精進(jìn)行擦拭。每周1次對(duì)移液器咀進(jìn)行75%酒精浸泡15分鐘左右，若使用過(guò)程中發(fā)生污染應(yīng)隨時(shí)浸泡處理。

4．3移液器的校準(zhǔn)

為確保移液器加樣的精確性和準(zhǔn)確性，正確使用移液器，需定期（一年）對(duì)移液器進(jìn)行校準(zhǔn)

4．3．1 校準(zhǔn)環(huán)境和用具要求

室溫：20～25℃，測(cè)定中波動(dòng)范圍不大于±0.5℃。

電子天平：放置于無(wú)塵和震動(dòng)影響的臺(tái)面上，房間盡可能有空調(diào)。稱量時(shí)，為保證天平內(nèi)的濕度（相對(duì)濕度60～90%），天平內(nèi)應(yīng)放置一裝有10mL蒸餾水的小燒杯。

小燒杯：5～10mL體積。

測(cè)定液體：溫度為20～25℃的去氣雙蒸水。

選定校準(zhǔn)體積：

a）擬校準(zhǔn)體積；

b）移液器標(biāo)定體積的中間體積。

c）最小可調(diào)體積（不小于擬定體積的10%）。

如為固定體積移液器，則只有一種校準(zhǔn)體積。

4．3．2 校準(zhǔn)步驟

a）將移液器調(diào)至擬校準(zhǔn)體積，選擇合適的吸頭；

b）調(diào)節(jié)好天平；

c）來(lái)回吸吹蒸餾水3次，以使吸頭濕潤(rùn)，用紗布拭干吸頭；

d）垂直握住移液器，將吸頭浸入液面2～3mm，緩慢（1～3秒）一致地吸取蒸餾水

e）將吸頭離開(kāi)液面，靠在管壁，去掉吸頭外部的液體；

f）將移液器以30℃角放入稱量燒杯中，緩慢一致地將移液器壓至第一檔，等待1～3秒，再壓至第二檔，使吸頭里的液體完全排出；

g）記錄稱量值；

h）擦干吸頭外面；

i）按上步驟稱量10次；

j）取10次測(cè)量值的均值作為最后移液器吸取的蒸餾水重量，按表1所列蒸餾水Z因子計(jì)算體積；

k）按校準(zhǔn)結(jié)果調(diào)節(jié)移液器。

4．3．3 比較校準(zhǔn)法

利用經(jīng)計(jì)量局校準(zhǔn)并頒發(fā)校準(zhǔn)報(bào)告之同型號(hào)移液器，在移液器量程范圍的高低兩個(gè)檔各選擇一個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)，利用電子天平稱量結(jié)果與已校準(zhǔn)移液器稱量結(jié)果進(jìn)行比較，完成校準(zhǔn)。

備注：連續(xù)可調(diào)移液器校準(zhǔn)由本市標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量局統(tǒng)一校準(zhǔn)。

（表1  蒸餾水Z因子 hPa(mbar)）

5. 相關(guān)記錄

儀器使用登記表

儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表

儀器設(shè)備檢定周期表

儀器設(shè)備維修申請(qǐng)表

儀器報(bào)廢（停用）單

儀器設(shè)備使用授權(quán)表

儀器設(shè)備檔案卡

儀器設(shè)備領(lǐng)（借）用登記表

儀 器 設(shè) 備 總 表

沙眼衣原體核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)

1．  目的：保證CT DNA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

2．  適用范圍：CT DNA的TaqMan熒光定量檢測(cè)，標(biāo)本類型為分泌物。

3．  負(fù)責(zé)人：     操作人：

4．  原理：本試劑盒用一對(duì)沙眼衣原體特異引物和一條沙眼衣原體特異性熒光探針，PCR反應(yīng)液，耐熱DNA聚合酶（Taq酶），四種核苷酸單體（dNTPs）等成分，再用PCR體外擴(kuò)增法檢測(cè)沙眼衣原體DNA。

5．  性能參數(shù)：檢出低值＜25基因拷貝/ml。

6． 標(biāo)本要求：

（1）標(biāo)本類型：分泌物。

（2）標(biāo)本采集：見(jiàn)標(biāo)本采集手冊(cè)。

（3）標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸：室溫放置不超過(guò)8小時(shí)，4-8℃不超過(guò)72小時(shí)，-20℃保存期6個(gè)月，應(yīng)避免反復(fù)凍融。室溫運(yùn)輸。

（4）標(biāo)本拒收狀態(tài)：細(xì)菌污染標(biāo)本不能作測(cè)定。

7． 容器和添加劑類型：無(wú)菌離心管和無(wú)菌試管。

8．  所需設(shè)備：ABI GeneAmp 5700、臺(tái)式高速離心機(jī)、混勻器、冰箱（4℃、-20℃）、生物安全柜、紫外燈

9．  試劑：DNA提取液（500μl/管）2管；CT-PCR反應(yīng)液（未貼標(biāo)簽管）20管；陽(yáng)性定量質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品（1×10⁸基因拷貝/ml）（50μl/管）1管；陰性質(zhì)控品（250μl/管）1管。

10．   校準(zhǔn)程序（計(jì)量學(xué)溯源性）：送XXX市計(jì)量檢測(cè)所校準(zhǔn)。

11．   程序步驟:：

11.1標(biāo)本采集、保存和運(yùn)送

男性：取尿道分泌物或細(xì)小棉拭子伸入快尿道約2~4cm，略捻拭子取出分泌物（應(yīng)略帶黏膜）。將分泌物或棉拭子置入無(wú)菌玻璃管，用無(wú)菌棉球?qū)⒃嚬苋�緊后，密閉送檢。

女性：陰道—用無(wú)菌生理鹽水棉球洗去宮頸外分泌物，再用無(wú)菌棉拭子插入宮頸內(nèi)，停5秒鐘后旋動(dòng)棉拭采取宮頸分泌物，將棉拭子置入無(wú)菌玻璃管，用無(wú)菌棉球?qū)⒃嚬苋�緊后，密閉送檢。

尿道—用無(wú)菌生理鹽水棉球洗凈尿道口，再用無(wú)菌棉拭子插入尿道約2cm，略捻拭子取出分泌物（應(yīng)略帶黏膜）。將棉拭子置入無(wú)菌玻璃管，用無(wú)菌棉球?qū)⒃嚬苋�緊后，密閉送檢。

標(biāo)本可立即用于測(cè)試，也可保存于-20℃待測(cè)，保存期為6個(gè)月。標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。

11.2標(biāo)本及對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品的處理

標(biāo)本試管中加入1ml無(wú)菌生理鹽水，充分震蕩搖勻，吸取液體轉(zhuǎn)至1.5ml離心管中（如分泌物較多，只取0.2ml）12000rpm離心5分鐘.沉淀加無(wú)菌生理鹽水1ml打勻,12000rpm離心5分鐘,再重復(fù)洗滌一次.沉淀直接加50ulDNA提取液充分混勻, (提取液內(nèi)含不溶于水的物質(zhì),取樣時(shí)需用加樣器充分混勻后吸取。如出現(xiàn)因吸頭嘴部太細(xì)不能吸取或取樣后堵塞吸頭的現(xiàn)象，可先用潔凈無(wú)污染的剪刀將吸頭嘴部剪去一截。) 沸水浴10分鐘（誤差不超過(guò)1分鐘），轉(zhuǎn)至4℃靜置6-8小時(shí)以保證充分裂解。12，000rpm離心2分鐘，取上清液2ul做PCR反應(yīng)。另取陰陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品各50ul加等量DNA提取液打勻，沸水浴10分鐘后同上處理。

11.3GeneAmp5700操作

取單管單人份PCR反應(yīng)管若干管，直接加入處理后樣品（或陰陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品）2ul，6000rpm離心數(shù)秒。將各反應(yīng)管放入PCR儀，按下列條件擴(kuò)增：

ABI GeneAmp5700的循環(huán)條件：93℃  2分鐘預(yù)變性，然后按93℃45秒  55℃60秒，先做10個(gè)循環(huán)，最后93℃30秒  55℃45秒，做30個(gè)循環(huán)。所有設(shè)置全部完成后保存文件，最后運(yùn)行程序。

11.4結(jié)果分析條件的設(shè)定

ABI GeneAmp5700的條件設(shè)置：反應(yīng)結(jié)束后保存檢測(cè)數(shù)據(jù)文件。根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)baseline的start值(2~4),stop值(7~9)以及Threshold值,使陰性質(zhì)控品Ct值為30,臨界陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品Ct值為22~24, 強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品Ct值為18~20,最后記錄儀器自動(dòng)分析計(jì)算出的Ct值.

12．   質(zhì)量控制程序：

陰性質(zhì)控品：全部陰性

陽(yáng)性定量標(biāo)準(zhǔn)品：全部陽(yáng)性

︱r︱≧0.97(correlation 數(shù)值介于-0.97~-1); 10⁸至10⁴基因拷貝/ml的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)的定量值與理論值相比誤差小于±300%。

13．   干擾：標(biāo)本污染。

14．    生物參考區(qū)間：正常人樣本為陰性或0基因拷貝/ml。

15．    患者檢驗(yàn)結(jié)果的可報(bào)告區(qū)間：Ct值<40，實(shí)驗(yàn)樣本的CT DNA含量（基因拷貝數(shù)/ml）=M；Ct值=40，樣品 CT DNA含量<25基因拷貝/ml。

16．   警告/危急值（當(dāng)適用時(shí)）：

17．   實(shí)驗(yàn)室解釋：為沙眼衣原體感染的輔助診斷以及治療提供分子生物學(xué)上的參考依據(jù)。

18．   其它：《沙眼衣原體核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)》見(jiàn)試劑盒

乙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)

1． 目的：保證HBV DNA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

2． 適用范圍：HBV DNA的TaqMan熒光定量檢測(cè)，標(biāo)本類型為血清。

3． 負(fù)責(zé)人：        操作人：

4． 原理：本試劑盒用一對(duì)乙型肝炎病毒特異引物和一條乙型肝炎病毒特異性熒光探針，PCR反應(yīng)液，耐熱DNA聚合酶（Taq酶），四種核苷酸單體（dNTPs）等成分，再用PCR體外擴(kuò)增法檢測(cè)丙型肝炎病毒cDNA。

5． 性能參數(shù)：檢出低值＜1×10³基因拷貝/ml。

6． 標(biāo)本要求：

（1）標(biāo)本類型：血清。

（2）標(biāo)本采集：見(jiàn)標(biāo)本采集手冊(cè)。

（3）標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸：室溫放置不超過(guò)8小時(shí)，4-8℃不超過(guò)72小時(shí)，-20℃保存期6個(gè)月，應(yīng)避免反復(fù)凍融。室溫運(yùn)輸。

（4）標(biāo)本拒收狀態(tài)：細(xì)菌污染、嚴(yán)重溶血或脂血標(biāo)本不能作測(cè)定。

7． 容器和添加劑類型：無(wú)菌離心管和無(wú)菌真空管

8． 所需設(shè)備：ABI GeneAmp 5700、臺(tái)式高速離心機(jī)、混勻器、冰箱（4℃、-20℃）、生物安全柜、紫外燈

9． 試劑：DNA提取液（500μl/管）2管；HBV-PCR反應(yīng)液（未貼標(biāo)簽管）20管；陽(yáng)性定量質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品（1×10⁸基因拷貝/ml）（50μl/管）1管；陰性質(zhì)控品（250μl/管）1管。

10．             校準(zhǔn)程序（計(jì)量學(xué)溯源性）：送深圳市計(jì)量檢測(cè)所校準(zhǔn)。

11．             程序步驟:：

11.1標(biāo)本處理：取血清標(biāo)本40μl，加等量DNA提取液打勻。（提取液內(nèi)含不溶于水的物質(zhì)，取樣時(shí)需用加樣器充分混勻后吸取。如出現(xiàn)因吸頭嘴部太細(xì)不能吸取或取樣后堵塞吸頭的現(xiàn)象，可先用潔凈無(wú)污染的剪刀將吸頭嘴部剪去一截。）沸水浴10分鐘（誤差不超過(guò)1分鐘），（為保證病毒顆粒充分裂解可轉(zhuǎn)至4℃靜置8~12小時(shí)）。10000rpm離心5分鐘，取上清2μl做PCR反應(yīng)。

11.2標(biāo)準(zhǔn)品稀釋和處理：將陽(yáng)性定量質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品（1×10⁸基因拷貝/ml）6000rpm離心數(shù)秒標(biāo)示為10⁸，另取4支滅菌新0.5ml離心管，分別加入45μl陰性質(zhì)控品，依次標(biāo)示為10^7~10⁴。吸取10⁸管5μl至10⁷管，用加樣器反復(fù)混勻后換新吸頭取5μl至10⁶管，依次方法稀釋至10⁴管。-20℃保存；分別吸取稀釋好的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品梯度和陰性質(zhì)控品管各40μl，加等量DNA提取液打勻，以下步驟同上處理。

11.3PCR擴(kuò)增：取HBV-PCR反應(yīng)管若干管，直接加入處理后的樣品管或陰陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品2μl，6000rpm離心1分鐘。將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)，按對(duì)應(yīng)順序設(shè)置陰性質(zhì)控品，陽(yáng)性定量質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品梯度以及未知標(biāo)本，并設(shè)置樣品名稱，標(biāo)記熒光基團(tuán)種類和循環(huán)條件：ABI GeneAmp 5700的循環(huán)條件：93℃→2分鐘預(yù)變性，然后按93℃45秒→55℃60秒，先做10個(gè)循環(huán)，最后按93℃30秒→55℃45秒，做30個(gè)循環(huán)。所有設(shè)置全部完成后保存文件，最后運(yùn)行程序。

11.4結(jié)果分析條件的設(shè)定：ABI GeneAmp 5700的條件設(shè)置：反應(yīng)結(jié)束后保存檢測(cè)數(shù)據(jù)文件。根據(jù)分析后圖象調(diào)節(jié)baseline的start值（2~4），stop值（7~9）以及Threshold值，使Std curve窗口下的標(biāo)準(zhǔn)曲線達(dá)到最佳（correlation數(shù)值介于-0.97~-1之間，correlation數(shù)值等同于|r|），最后到Reporter窗口下記錄儀器自動(dòng)分析計(jì)算出的未知標(biāo)本數(shù)值（Qty）。

12．             質(zhì)量控制程序：

陰性質(zhì)控品：全部陰性

陽(yáng)性定量標(biāo)準(zhǔn)品：全部陽(yáng)性

︱r︱≧0.97(correlation 數(shù)值介于-0.97~-1); 10⁸至10⁴基因拷貝/ml的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)的定量值與理論值相比誤差小于±300%。

13．             干擾（如乳糜血、溶血、膽紅素血）和交叉反應(yīng)：乳糜血、溶血、膽紅素血基本不影響本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定。

14．             生物參考區(qū)間：正常人樣本為陰性或0基因拷貝/ml。

15．             患者檢驗(yàn)結(jié)果的可報(bào)告區(qū)間：Ct值<40，實(shí)驗(yàn)樣本的HBV DNA含量（基因拷貝數(shù)/ml）=M；Ct值=40，樣品 HBV DNA含量<1 ×10³基因拷貝/ml。

16．             警告/危急值（當(dāng)適用時(shí)）：

17．             實(shí)驗(yàn)室解釋：為乙型肝炎感染的輔助診斷以及治療提供分子生物學(xué)上的參考依據(jù)。

18．             其它：《乙型肝炎病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)》見(jiàn)試劑盒

丙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)

1． 目的：保證HCV DNA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

2． 適用范圍：HCV DNA的TaqMan熒光定量檢測(cè)，標(biāo)本類型為血清。

3． 負(fù)責(zé)人：        操作人：

4． 原理：本試劑盒用一對(duì)丙型肝炎病毒特異引物和一條丙型肝炎病毒特異性熒光探針，配以逆轉(zhuǎn)錄液，逆轉(zhuǎn)錄酶，PCR反應(yīng)液，耐熱DNA聚合酶（Taq酶），四種核苷酸單體（dNTPs）等成分，先將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，再用PCR體外擴(kuò)增法檢測(cè)丙型肝炎病毒cDNA。

5． 性能參數(shù)：檢出低值＜1×10³基因拷貝/ml。

6． 標(biāo)本要求：

（1）標(biāo)本類型：血清。

（2）標(biāo)本采集：見(jiàn)標(biāo)本采集手冊(cè)。

（3）標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸：室溫放置不超過(guò)2小時(shí)，4-8℃不超過(guò)72小時(shí)，-20℃保存期6個(gè)月，應(yīng)避免反復(fù)凍融，室溫運(yùn)輸。

（4）標(biāo)本拒收狀態(tài)：細(xì)菌污染、嚴(yán)重溶血或脂血標(biāo)本不能作測(cè)定。

7． 容器和添加劑類型：無(wú)菌離心管和無(wú)菌真空管。

8． 所需設(shè)備：ABI GeneAmp 5700、臺(tái)式高速離心機(jī)、混勻器、冰箱（4℃、-20℃）、生物安全柜、紫外燈。

9． 試劑：DNA提取液（500μl/管）2管；HCV-PCR反應(yīng)液（未貼標(biāo)簽管）20管；陽(yáng)性定量質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品（1×10⁸基因拷貝/ml）（50μl/管）1管；陰性質(zhì)控品（250μl/管）1管。

10．             校準(zhǔn)程序（計(jì)量學(xué)溯源性）：

11．             程序步驟:：

11.1標(biāo)本采集和運(yùn)送

用無(wú)菌注射器抽取受檢者靜脈血1ml，注入無(wú)菌1.5ml離心管,于室溫靜置2小時(shí),轉(zhuǎn)至4℃靜置1小時(shí)。8000rpm離心5分鐘，吸取200ul血清(注意勿帶入紅細(xì)胞)轉(zhuǎn)入另一無(wú)菌1.5ml離心管，即為血清標(biāo)本。標(biāo)本可立即用于測(cè)試（48小時(shí)以內(nèi)），也可保存于-20℃待測(cè)，保存期為6個(gè)月。標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。

11.2標(biāo)本及對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品的處理

     向一新的經(jīng)高壓滅菌處理過(guò)的0.5ml離心管中加入10ul充分混勻的RNA提取液(RNA 提取液A易沉淀,取樣前需用移液器反復(fù)吸打混勻后吸取)。加入50ul血清或陰陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品，再加入200ul的RNA提取液B充分混勻。室溫放置5分鐘，6000rpm，離心1分鐘，小心吸去上清，用75%的預(yù)冷乙醇（DEPC水配制）洗沉淀兩次。（取75%乙醇400ul洗沉淀，充分震蕩混勻，6000rpm，離心1分鐘，然后去上清，再用75%的乙醇400ul重復(fù)同上處理），65℃干燥沉淀10分鐘。（注：75%的乙醇配制時(shí)須用試劑盒中提供的DEPC H₂O）。

11.3逆轉(zhuǎn)錄

向沉淀管加入18ul HCV反應(yīng)液I以及逆轉(zhuǎn)錄酶系2ul，震蕩均勻，瞬間（3秒）離心后37℃放置45分鐘，95℃加熱3分鐘。瞬間（3秒）離心后，吸取5ul逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物做PCR反應(yīng)。

11.4PCR擴(kuò)增及DA-620儀器熒光檢測(cè)操作

取單管單人份PCR反應(yīng)管若干管，直接加入處理后樣品（或陰陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品）2ul，6000rpm離心數(shù)秒。將各后應(yīng)管放入PCR儀器的孔反應(yīng)槽內(nèi)，在電腦上按對(duì)應(yīng)順序設(shè)置陰陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品以及未知標(biāo)本，并設(shè)置樣品名稱、標(biāo)記熒光基團(tuán)類和循環(huán)條件：

ABI GeneAmp5700的循環(huán)條件：93℃  2   分鐘預(yù)變性，然后按93℃45秒  55℃60秒，先做10個(gè)循環(huán)，最后93℃30秒  55℃45秒，做30個(gè)循環(huán)。所有設(shè)置全部完成后保存文件，最后運(yùn)行程序。

11.5結(jié)果分析條件的設(shè)定

ABI GeneAmp5700的條件設(shè)置：反應(yīng)結(jié)束后保存檢測(cè)數(shù)據(jù)文件。根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)baseline的start值(2~4),stop值(7~9)以及Threshold值,使陰性質(zhì)控品Ct值為30,臨界陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品Ct值為22~24, 強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品Ct值為18~20,最后記錄儀器自動(dòng)分析計(jì)算出的Ct值.

12. 質(zhì)量控制程序：

13. 干擾（如乳糜血、溶血、膽紅素血）和交叉反應(yīng)：乳糜血、溶血、膽紅素血基本不影響本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定。

14. 生物參考區(qū)間：正常人樣本為陰性或0基因拷貝/ml。

15. 患者檢驗(yàn)結(jié)果的可報(bào)告區(qū)間：Ct值<40，實(shí)驗(yàn)樣本的HCV DNA含量（基因拷貝數(shù)/ml）=M；Ct值=40，樣品 HCV DNA含量<1 ×10³基因拷貝/ml。

16. 警告/危急值（當(dāng)適用時(shí)）：

17. 實(shí)驗(yàn)室解釋：為丙型肝炎感染的輔助診斷以及治療提供分子生物學(xué)上的參考依據(jù)。

18. 其它：《丙型肝炎病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)》見(jiàn)試劑盒

結(jié)核桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)

1． 目的：保證TB DNA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

2． 適用范圍：TB DNA的TaqMan熒光定量檢測(cè)，標(biāo)本類型為血清。

3． 負(fù)責(zé)人：      操作人：  

4． 原理：本試劑盒用一對(duì)結(jié)核桿菌特異引物和一條結(jié)核桿菌特異性熒光探針，PCR反應(yīng)液，耐熱DNA聚合酶（Taq酶），四種核苷酸單體（dNTPs）等成分，再用PCR體外擴(kuò)增法檢測(cè)結(jié)核桿菌DNA。

5． 性能參數(shù)：檢出低值＜1×10³基因拷貝/ml。

6． 標(biāo)本要求：

（1）標(biāo)本類型：血清。

（2）標(biāo)本采集：見(jiàn)標(biāo)本采集手冊(cè)。

（3）標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸：室溫放置不超過(guò)8小時(shí)，4-8℃不超過(guò)72小時(shí)，-20℃保存期6個(gè)月，應(yīng)避免反復(fù)凍融。室溫運(yùn)輸。

（4）標(biāo)本拒收狀態(tài)：細(xì)菌污染、嚴(yán)重溶血或脂血標(biāo)本不能作測(cè)定。

7． 容器和添加劑類型：無(wú)菌離心管和無(wú)菌真空管。

8． 所需設(shè)備：ABI GeneAmp 5700、臺(tái)式高速離心機(jī)、混勻器、冰箱（4℃、-20℃）、生物安全柜、紫外燈

9． 試劑：DNA提取液（500μl/管）2管；TB-PCR反應(yīng)液（未貼標(biāo)簽管）20管；陽(yáng)性定量質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品（1×10⁸基因拷貝/ml）（50μl/管）1管；陰性質(zhì)控品（250μl/管）1管。

10．             校準(zhǔn)程序（計(jì)量學(xué)溯源性）：送深圳市計(jì)量檢測(cè)所校準(zhǔn)。

11．             程序步驟:：

11.1標(biāo)本處理：標(biāo)本采集、保存和運(yùn)送     

用無(wú)菌5ml玻璃管取受檢者肺深部咳出痰液1~3ml，密閉，即為標(biāo)本。或直接抽取外周血2ml（抗凝）。標(biāo)本可立即用于測(cè)試，也可保存于-20℃待測(cè)，保存期為六個(gè)月。標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。

11.2標(biāo)本及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品的處理

痰液中加入4倍體積的4%NaOH室溫放置10分鐘后15000rpm離心5分鐘。去上清，沉淀加無(wú)菌生理鹽水1ml打勻，15000rpm離心5分鐘；再重復(fù)洗滌一次。（知液標(biāo)本直用淋巴細(xì)胞分離液分離沉淀）沉淀直接加50ulDNA提取液充分混勻,(提取液內(nèi)含不溶于水的物質(zhì),取樣時(shí)需用加樣器充分混勻后吸取。如出現(xiàn)因吸頭嘴部太細(xì)不能吸取或取樣后堵塞吸頭的現(xiàn)象，可先用潔凈無(wú)污染的剪刀將吸頭嘴部剪去一截。)沸水浴10分鐘（誤差不超過(guò)1分鐘），轉(zhuǎn)至4℃靜置6-8小時(shí)以保證充分裂解。10，000rpm離心5分鐘，取上清液2ul做PCR反應(yīng)。另取陰陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品各40ul加等量DNA提取液打勻，沸水浴10分鐘后同上處理。

11.3PCR擴(kuò)增及DA-620儀器熒光檢測(cè)操作

取單管人份PCR反應(yīng)管一管，直接加入處理后樣品或陰陽(yáng)性質(zhì)控品2ul，6000rpm離心數(shù)秒。將各反應(yīng)管放入PCR儀，按下列條件擴(kuò)增：

93℃  2分鐘預(yù)變性,然后按93℃45秒  55℃120秒,反應(yīng)10個(gè)循環(huán)后置33℃保溫,迅速逐個(gè)將反應(yīng)管放入熒光檢測(cè)儀,讀取并記錄讀當(dāng)數(shù)A₀。熒光激發(fā)波長(zhǎng)為487nm，檢測(cè)波長(zhǎng)為525nm。最后按93℃45秒  55℃120秒，共做30個(gè)循環(huán)后置33℃保溫。使用PE9600，9700，2400儀器循環(huán)參數(shù)為93℃30秒  55℃60秒，其它儀器循環(huán)參數(shù)為93℃45秒  55℃120秒。

PCR反應(yīng)后熒光檢測(cè)，待各PCR管充分冷卻至33℃后，迅速逐個(gè)將擴(kuò)增后的反應(yīng)管放入熒光檢測(cè)儀，讀取并記錄讀數(shù)A₁。熒光激發(fā)波長(zhǎng)為487nm，檢測(cè)波長(zhǎng)為525nm。

11.4 ABI GeneAmp5700操作

將各后應(yīng)管放入PCR儀器的孔反應(yīng)槽內(nèi)，按對(duì)應(yīng)順序設(shè)置陰陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品以及未知標(biāo)本，并設(shè)置樣品名稱、標(biāo)記熒光基團(tuán)類和循環(huán)條件：

ABI GeneAmp5700的循環(huán)條件：93℃  2分鐘預(yù)變性，然后按93℃45秒  55℃60秒，先做10個(gè)循環(huán)，最后93℃30秒  55℃45秒，做30個(gè)循環(huán)。

11.5結(jié)果分析條件的設(shè)定

ABI GeneAmp5700的條件設(shè)置：反應(yīng)結(jié)束后保存檢測(cè)數(shù)據(jù)文件。根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)baseline的start值(2~4),stop值(7~9)以及Threshold值,使陰性質(zhì)控品Ct值為30,臨界陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品Ct值為22~24,強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品Ct值為18~20,最后記錄儀器自動(dòng)分析計(jì)算出的Ct值.

12．             質(zhì)量控制程序：

陰性質(zhì)控品：全部陰性

陽(yáng)性定量標(biāo)準(zhǔn)品：全部陽(yáng)性

︱r︱≧0.97(correlation 數(shù)值介于-0.97~-1); 10⁸至10⁴基因拷貝/ml的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)的定量值與理論值相比誤差小于±300%。

13．             干擾（如乳糜血、溶血、膽紅素血）和交叉反應(yīng)：乳糜血、溶血、膽紅素血基本不影響本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定。

14．             生物參考區(qū)間：正常人樣本為陰性或0基因拷貝/ml。

15．             患者檢驗(yàn)結(jié)果的可報(bào)告區(qū)間：Ct值<40，實(shí)驗(yàn)樣本的TB DNA含量（基因拷貝數(shù)/ml）=M；Ct值=40，樣品 TB DNA含量<1 ×10³基因拷貝/ml。

16．             警告/危急值（當(dāng)適用時(shí)）：

17．             實(shí)驗(yàn)室解釋：為結(jié)核桿菌感染的輔助診斷以及治療提供分子生物學(xué)上的參考依據(jù)。

18．             其它：《結(jié)核分支桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)》見(jiàn)試劑盒

高速冷凍離心機(jī)使用、維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序

1．目的：保證高速冷凍離心機(jī)的正常使用。

2．適用范圍：適用于本室使用的高速冷凍離心機(jī)。

3．負(fù)責(zé)人：       操作人：

4. 性能參數(shù):見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。

5．程序：

5．1 離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅(jiān)固的地板或平臺(tái)上，并力求使儀器處于水平位置以免離心時(shí)造成儀器振蕩。

5．2 打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，將預(yù)先平衡好的樣品對(duì)稱放置于轉(zhuǎn)頭的樣品架上，關(guān)閉機(jī)蓋。

5．3 旋動(dòng)定時(shí)旋鈕設(shè)定離心時(shí)間，緩慢旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)旋鈕使儀器轉(zhuǎn)速達(dá)到預(yù)定要求。

5．4 離心完畢后，將轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)回零位，關(guān)閉電源開(kāi)關(guān)。

5．5 待離心機(jī)完全停止轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)打開(kāi)機(jī)蓋，取出離心樣品，再次關(guān)閉機(jī)蓋結(jié)束離心。

5．6 離心室的清潔：為了避免樣本等殘留物的污染，應(yīng)經(jīng)常對(duì)離心機(jī)外殼和離心室進(jìn)行清潔處理。對(duì)離心室清潔，應(yīng)先打開(kāi)離心機(jī)蓋，撥掉電源線，用專用設(shè)備將離心機(jī)轉(zhuǎn)子旋下，再用中性去污劑（70%的異丙醇/水混合物或乙醇去污染）清潔離心室；離心室內(nèi)的橡膠密封圈經(jīng)去污劑處理后，用水沖洗，再用甘油潤(rùn)滑。

5．7 轉(zhuǎn)子的清潔：轉(zhuǎn)子會(huì)被樣本殘留物污染，也可能會(huì)被某些化學(xué)試劑腐蝕，因此應(yīng)對(duì)轉(zhuǎn)子每月進(jìn)行清潔維護(hù)。每月用中性的清潔劑清潔轉(zhuǎn)子一次，并在儀器維護(hù)記錄本上作好記錄，以延長(zhǎng)轉(zhuǎn)子的壽命。

6. 儀器維護(hù)

(1) 為確保安全和離心效果,儀器必須放置在堅(jiān)固水平的臺(tái)面上,塑料蓋門上不得放置任何物品,樣品必須對(duì)稱放置,并在開(kāi)機(jī)前確保已擰緊螺母。

(2) 應(yīng)經(jīng)常檢查轉(zhuǎn)頭及試驗(yàn)用的離心管是否有裂紋,老化等現(xiàn)象,如有須及時(shí)更換.

(3) 試驗(yàn)完畢后,需將儀器擦拭干凈,以防腐蝕.

(4) 如樣品比重超過(guò)1.2g/cm³,最高轉(zhuǎn)速n按下式計(jì)算:n=nmax*√--1.2/樣呂比重.

(5) 當(dāng)電機(jī)碳刷長(zhǎng)度小于6mm時(shí),必須及時(shí)更換.

(6) 在離心機(jī)未停穩(wěn)時(shí)不得開(kāi)蓋.

(7) 儀器必須有可靠接地.

(8) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,請(qǐng)關(guān)閉后面的電源開(kāi)關(guān),撥掉電源插頭時(shí),請(qǐng)不要忘了打開(kāi)后面的電源開(kāi)關(guān).

(9) 該儀器在日常使用中請(qǐng)注意符合“5.6,5.7”要求。

      (10) 嚴(yán)格按照儀器的開(kāi)關(guān)機(jī)程序關(guān)機(jī)。

7. 期間核查

(1)本儀器不需要特別的周期間隔。

(2) 校準(zhǔn)物均為與ICSH之標(biāo)準(zhǔn)相符合的校準(zhǔn)物，測(cè)定值偏差均不超過(guò)其規(guī)定值。

8. 相關(guān)記錄

儀器使用登記表

儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表

儀器設(shè)備檢定周期表

儀器設(shè)備維修申請(qǐng)表

儀器報(bào)廢（停用）單

儀器設(shè)備使用授權(quán)表

儀器設(shè)備檔案卡

儀器設(shè)備領(lǐng)（借）用登記表

儀器設(shè)備總表

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