膠體金法主要生產工藝

一、原理

免疫膠體金技術是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種免疫標記技術。膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，稱為膠體金。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合，由于這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質的生物特性。膠體金類試劑是采用膠體金標記的抗體或抗原包被于玻璃纖維膜、聚脂膜或其他載體，將相關抗原或抗體固相連接在硝酸纖維膜，應用層析法的原理檢測樣品中的抗原或抗體的快速檢測試劑。

二、主要生產工藝

（一）膠體金的制備

采用枸櫞酸三鈉還原法或其他方法制備膠體金，膠體金顆粒大小應符合規定，膠體金標記物在510～560nm波長處應有最大吸收值，置2～8℃保存，應在規定的保存期內使用。枸櫞酸三鈉還原法生產膠體金，金顆粒大小受濃度、煮沸時機等因素影響，改變這些因素便可生產出不同顆粒大小的膠體金。

膠體金的檢查指標有顆粒的大小，粒徑的均一程度和有無凝集顆粒程度，可以通過肉眼觀察，但需要一定的經驗，良好的膠體金應該是清亮透明的。

所用設備：加熱攪拌設備。

（二）膠體金的標記以及濃度的確定

膠體金對蛋白的吸附主要取決于pH值，在接近蛋白質的等電點或偏堿的條件下，二者容易形成牢固的結合物。如果膠體金的pH值低于蛋白質的等電點時，則會聚集而失去結合能力。除此以外膠體金顆粒的大小、離子強度、蛋白質的分子量等都影響膠體金與蛋白質的結合。

（三）檢測線及質控線的制備

取已確定使用濃度的相關抗原或抗體，在硝酸纖維素膜上制備檢測線，應用同樣方法制備質控線，根據生產工藝在規定的溫度、濕度條件下干燥，置規定的濕度（通過驗證方法確定相對濕度要求）條件下存放。檢測線與質控線應具有間隔距離要求，應對所用的金標用玻璃纖維及硝酸纖維素膜等進行質量檢測，如尺寸、外觀、包裝及吸附性能等，并記錄批號、數目、標識，不同批號的玻璃纖維及硝酸纖維素膜不能混用。

（四）貼膜、切割、裝袋

貼膜、切割及裝袋應在具有相應濕度（通過驗證方法確定相對濕度要求）條件下操作，切割的膜條應有寬度要求。